Un système recombinant de transcription in vitro chez Mycobacterium tuberculosis

Abstract

L'agent causal de la tuberculose, Mycobacterium tuberculosis , demeure l'un des plus grands tueurs de l'histoire de l'humanité. L'étude des facteurs de virulence de cette bactérie est récente et demeure dans la mire de plusieurs groupes de recherche à travers le monde. Dans le cadre de mes travaux, nous nous sommes intéressés à l'étude in vitro de l'initiation de la transcription. Plus particulièrement, nous avons mis au point un système de transcription in vitro avec les composantes recombinantes de l'ARN polymérase de M. tuberculosis . La méthode est simple, rapide et ne nécessite pas d'installations à haut niveau de confinement de biosécurité. L'assemblage du noyau catalytique en parallèle à la purification des 13 facteurs [sigma] permet la reconstitution des différentes holoenzymes bactériennes selon les besoins expérimentaux. L'efficacité du système a été démontrée en comparant les sites d'initiation de la transcription connus provenant d'études in vivo à ceux obtenus avec nos holoenzymes recombinantes reconstituées. Nous avons ainsi montré que notre système peut servir pour l'identification du ou des facteurs [sigma] responsables de la transcription sur une région promotrice d'intérêt.