Développement et caractérisation de nouveaux inhibiteurs de la nucléoside triphosphate diphosphohydrolase (NTPDASE)

Abstract

Le but de notre travail a été de développer et de caractériser de nouveaux inhibiteurs pour la NTPDase1. Nous avons aussi purifié l'apyrase de pomme de terre pour caractériser son site actif afin d'élaborer, à plus long terme, un modèle moléculaire permettant le développement de meilleurs inhibiteurs pour les NTPDases. Dans un premier temps, nous avons testé la capacité d'analogues de la fluorescéine à inhiber l'activité ATPDase d'un extrait enrichi en NTPDase1, en mesurant la relâche de phosphate selon la méthode de dosage au vert de Malachite. Nous avons remarqué que l'érythrosine B et le Rose de Bengale sont de bons inhibiteurs de la NTPDase1. Cependant, ces composés interagissent également avec d'autres protéines qui lient l'ATP telles que certaines kinases et les canaux Na[indice supérieur+]/K[indice supérieur+]-ATPases. Dans un deuxième temps, nous avons testé une nouvelle série d'analogues de l'ATP modifiés sur le phosphate alpha, les dérives adénosine 5'-O-(1-boranotriphosphate). Finalement, nous avons commencé la mise au point d'une nouvelle méthode pour établir la structure du site actif des NTPDases, la méthode de PALM (voir chapitre 2)."--Résumé abrégé par UMI.