Construction des enzymes hybrides entre la chitinase de l'orge et la chitosanase de Streptomyces SP. N174

Abstract

Dans le cadre de ce projet, nous avons tenté de fusionner deux glycosyl hydrolases non homologues: la chitosanase de Streptomyces sp. N174 et la chitinase de l'orge. Ces deux protéines comptent parmi les enzymes les mieux étudiées et caractérisées au sein de leurs familles respectives. Toutes les données concernant leurs séquences d'ADN, leurs séquences primaires, leurs structures tertiaires et leurs sites catalytiques sont disponibles. En plus de la similitude de leurs substrats respectifs, ces deux protéines possèdent des structures secondaires similaires qu'on a pu superposer grâce au programme SARF-2 qui permet de déterminer les régions qui occupent la même position dans l'espace. L'idée du projet était d'échanger certains segments de la chitosanase par des régions qui lui sont superposables et dérivant de la chitinase. Le but était d'essayer d'obtenir des protéines hybrides avec de nouvelles propriétés hydrolytiques. La technique de la mutagenèse dirigée a été utilisée pour créer des sites de restrictions uniques permettant de fusionner ces deux protéines."--Résumé abrégé par UMI