Génération d'une inosine-uridine nucléoside hydrolase (IU-NH) par évolution moléculaire dirigée capable de mieux fonctionner en solvant organique

Abstract

L'approche d'évolution moléculaire dirigée, laquelle est un ensemble de méthodes in vitro et in vivo basées sur la génération d'une bibliothèque de chimères suivie d'une méthode rapide de sélection, a été utilisée pour modifier et améliorer diverses propriétés d'une protéine comme la thermostabilité, la solubilité, le niveau d'expression du gène et l'activité dans un environnement naturel ou non-naturel. Nous avons utilisé la mutagénèse dirigée et le"DNA shuffling", une technique d'évolution dirigée, pour tenter de convertir la nucléoside hydrolase en une enzyme capable d'opérer dans un milieu pauvre en eau, la réaction inverse de l'hydrolyse, ouvrant de ce fait la porte à la synthèse d'agents antiviraux ou antitumoraux. Cette protéine suscite beaucoup d'intérêt au niveau de la chimie médicinale. Le projet est basé sur un gène synthétique de 985 paires de bases codant pour l'inosine uridine nucléoside hydrolase (RU-NH) comparable au gène du protozoaire Crithidia fasciculata, préalablement assemblé et cloné dans Escherichia coli.