Purification et caractérisation de la [bêta]-1,6 glucanase produite par streptomyces SP.EF-14

Abstract

Le pourridié des racines du framboisier est une maladie causée par un champignon phytopatogène du genre Phytophthora . La prolifération de celui-ci peut-être diminuée par l'utilisation de produits chimiques l'Érridomil et l'Aliette. Malheureusement, depuis les années 1990 des souches de Phytophthora fragariae var fragariae résistantes à ce moyen de lutte ont été observées. L'élaboration d'un moyen de lutte biologique active contre Phytophthora devenait une alternative intéressante, soucieuse de l'environnement. Dans notre laboratoire, des actinomycètes, bactéries du sol à Gram positifs, ont été sélectionnés pour leur capacité à protéger les plants de framboisiers ( Rubus strigosus ) contre les infections causées par les Phytophthora . La paroi de ce phytopathogène est en grande partie constituée de glucanes, polymères composés de molécules de glucoses formées par des liens glycosidiques de type ß. Les actinomycètes capables d'inhiber la croissance de Phytophthora , produisent des enzymes extracellulaires capables de lyser la paroi cellulaire de ce champignon. Ces enzymes sont les ß-glucanases. Comme les ß-glucanases sembleraient jouer un rôle important au sein du phénomène d'antagonisme, nous avons donc entrepris l'étude des glucanases produite chez une souche antagoniste au Phytophthora, Streptomyces sp. EF-14. Cette souche à été choisie parmi d'autres pour son excellente production de ß-glucanases. Le but à long terme serait d'élaborer un programme de lutte biologique efficace contre l'agent causal du pouridié des racines du framboisier. C'est la ß-1,6 glucanase qui nous intéresse plus particulièrement dans le présent projet. Elle aurait une participation importante dans la destruction de la paroi cellulaire du Phytophthora . Dans ce projet, les conditions de culture et de production de la ß-1,6 glucanase par la souche Streptomyces EF-14 en fermenteur ont été maximisées. De plus, nous avons élaboré un protocole de purification efficace de la ß-1,6 glucanase produite par EF-14. Par la suite, des séquences internes en acides aminés de la protéine purifiée ont été obtenues.