Clonage et expression d'un gène codant pour une [bêta]-1,6-glucanase provenant de l'actinomycète Streptomyces sp.EF-14

Abstract

Ce projet de recherche a débuté avec la construction d'une banque de gènes de Streptomyces sp. EF-14 dans Escherichia coli afin de cloner le gène de la [bêta]-1,6-glucanase. Le vecteur navette pFD666 a été utilisé pour faciliter le transfert de cette banque dans une souche hétérologue, Streptomyces lividans TK-24. Pour le criblage de la banque de gènes, deux méthodes ont été utilisées: la première est la détection phénotypique sur boîte de pétri qui laisse apparaître une zone claire, visible à l'oeil nu, due à la dégradation du substrat par l'enzyme et la seconde est l'hybridation avec l'oligonucléotide KF-1 pour une sélection par élimination des populations plasmidiques. La détection phénotypique sur un milieu contenant le pustulane comme source de carbone nous a permis de sélectionner un clone [bêta]-1,6-glucanase positif: pMH31. Par hybridation, la région d'homologie avec l'oligonucléotide KF-1 a été localisée sur un fragment d'ADN de 1,58 Kb du clone pMH31."--Résumé abrégé par UMI.