Analyse de l'expression du gène ZPK dans la lignée de cellules P19 et production d'un anticorps

Abstract

ZPK est une nouvelle protéine serine/thréonine kinase cytosolique contenant des motifs structuraux analogues à ceux présents chez les membres de la famille des"mixed-lineage kinases". La protéine kinase ZPK semble être impliquée dans les processus de contrôle de prolifération et de différenciation cellulaire. Dans le but de confirmer la relation possible entre ZPK et la différenciation cellulaire, l'expression de ce gène a été analysée dans la lignée de cellules P19. Ces cellules, lorsque traitées avec une concentration de 10[indice supérieur -6]M d'acide rétinoïque, se différencient en cellules de type neuronal. Ainsi, le niveau d'expression a été étudié avant et après l'induction de la différenciation cellulaire. Une analyse par Northern blot a pu montrer que les cellules P19 non différenciées contiennent un niveau très faible d'ARNm de ZPK; par contre, lorsque ces cellules se différencient en cellules de type neuronal en présence d'acide rétinoïque, ce niveau d'expression augmente de façon drastique. De plus, on a pu déterminer par une analyse de la stabilité de l'ARNm de ZPK et par une expérience de transcription nucléaire que l'augmentation du niveau d'ARNm est reliée à une régulation transcriptionnelle et non post-transcriptionnelle. D'autre part, dans l'optique d'élargir les possibilités d'investiguer le rôle de la protéine kinase ZPK, un anticorps anti-ZPK a été produit chez le lapin. Pour ce faire, une protéine de fusion bactérienne, contenant une portion du domaine carboxy-terminal de ZPK, fut construite et injectée à des lapins. Les premières analyses visant à caractériser l'anticorps, effectuées par immunobuvardage, ont pu montrer que cet anti-ZPK reconnaît bel et bien la protéine kinase ZPK. Cet outil de travail va permettre la réalisation de nouvelles expériences pour l'étude de la fonction de cette protéine kinase.