Purification et caractérisation de l'ATP-diphosphohydrolase du coeur de boeuf

Abstract

L'ATP et l'adénosine extracellulaire exercent des effets physiologiques importants sur le coeur des mammifères. Le contrôle de la concentration des nucléotides extracellulaires est fait par des ectonucléotidases tel que des ATPases, ADPases et la 5'-nucléotidase. La présence de ces deux types d'activités à la surface des cardiomyocytes a permis d'énoncer l'hypothèse suivante: Une ATP-diphosphohydrolase (ATPDase: EC 3.6.1.5) est responsable de l'activité ADPasique présente à la surface des cellules cardiaques.L'hypothèse repose en grande partie sur le fait que cette enzyme a été mise en évidence dans les vaisseaux sanguins.L'ATPDase, aussi appelée apyrase, est une enzyme responsable de l'hydrolyse séquentielle des groupements [gamma] et [bêta] phosphate des triphospho-et disphosphonucléosides. La préparation finale de purification contient deux formes de l'enzyme soit le type I de 54 kDa et le type II de 78 kDa. La spécificité de substrat, la courbe de dénaturation par la chaleur et la copurification des activités ATPasique et ADPasique confirment l'identité de l'enzyme comme étant une ATPDase.L'immunolocalisation révèle une forte réaction à la surface des membranes plasmiques des cellules myocardiques banales et des fibres de Purkinje de même qu'une faible réaction dans le cytoplasme. Cette enzyme étant reconnue pour être une ectoenzyme, elle semble jouer un rôle majeur, de concert avec la 5'-nucléotidase, au niveau de la conversion de l'ATP extracellulaire en adénosine dans le ventricule du coeur, plus spécifiquement dans les condition d'hypoxie. Ce rôle majeur correspond en fait à l'annulation des effets physiologiques médiés par les purinorécepteurs P[indice inférieur 2] et à l'induction des réponses physiologiques médiés par les purinorécepteurs P[indice inférieur 1]. (Résumé abrégé par UMI.)