Identification des déterminants moléculaires de la liaison et de l'activation du récepteur AT[indice inférieur 1] de l'angiotensine II

Abstract

Les récepteurs couplés aux protéines G (GPCR) sont formés de sept domaines transmembranaires. Cette famille de récepteur fait l'objet d'études qui visent à comprendre leurs fonctions, leurs interactions avec leurs ligands, les changements de conformations produits suite à cette liaison ainsi que leur mécanisme d'activation. Notre hypothèse est que le récepteur humain de l'angiotensine II de type 1 (hAT1 ) possède des déterminants moléculaires responsables de sa liaison à l'angiotensine II (AngII). Nos objectifs sont d'identifier des déterminants moléculaires responsables de sa liaison à AngII, ainsi que d'identifier des changements de conformations générés suite à cette liaison. Dans un premier temps, les déterminants de la liaison de la position C-terminale de l'AngII ont été identifiés directement grâce à des études de photomarquage par affinité sur le récepteur hAT 1. Ces études nous ont permis d'observer que l'acide aminé photoactivable utilisé, le para -benzoyl- L -phénylalanine (Bpa), présentait une sélectivité prononcée pour la méthionine. Nous avons exploité cette sélectivité du Bpa pour mettre au point une nouvelle approche : l'essai de proximité aux méthionines (MPA). Afin de déterminer l'environnement tridimensionnel de la position C-terminale de l'AngII dans le récepteur hATI, nous avons dans un premier temps étudié les domaines transmembranaires (TMD) III, VI et VII en mutant individuellement chacune des positions par une méthionine. Cette étude a permis de déterminer l'orientation relative des résidus identifiés de chaque TMD formant la pochette de liaison. Nous avons fait une étude MPA comparative avec le mutant constitutivement actif N111G-hAT 1 , afin de pouvoir déterminer des changements de hAT1 qui surviennent lors de l'activation, sur les TMD III, VI et VII et avons trouvé qu'une seule différence. La conclusion de l'étude impliquait un mouvement du TMD VI lors de l'activation. Dans une autre étude, les 4 derniers TMD (I, II, IV, V) ont été étudiés à la fois à l'état basal et actif. Cette étude permit d'identifier que les TMD II et V participent à la formation de la pochette de liaison de l'AngII dans la forme active uniquement, impliquant des mouvements dans ces 2 TMD aussi. Suite à l'identification des résidus des TMD participant à la structure de la pochette de liaison, dans la forme active ou inactive, nous avons construit des modèles du récepteur hATI ligandé dans la forme inactive et de la forme constitutivement active et les avons comparés. L'ultime but de ce projet est de présenter un modèle d'activation général des GPCR mais plus concrètement une meilleure compréhension des bases moléculaires de la liaison, de l'activation et des changements conformationnels d'un GPCR.