| dc.description.abstract | Dans les cellules, le récepteur de Vinositol 1,4,5-trisphosphate (IP[indice inférieur 3]R) est un canal calcique intracellulaire qui joue un rôle primordial dans la régulation du Ca[indice supérieur 2+] cytosolique. II existe trois types d'IP3Rs et leurs différences du point de vue pharmacologique et fonctionnel sont relativement peu connues. Les cellules RINm5F expriment presque exclusivement l'IP[indice inférieur 3]R-3 et constituent donc un excellent modèle pour étudier spécifiquement cette isoforme. Dans la première partie de ce travail, nous avons démontré que l'IP[indice inférieur 3] libère du Ca[indice supérieur 2+] dans les cellules RINm5F et que la protéine kinase C (PKC) phosphoryle IP[indice inférieur 3]R-3 in vitro. Des études de phosphorylation in cellulo montrent que le phorbol-myristate-acetate (PMA), un activateur direct de la PKC phosphoryle IP[indice inférieur 3]R-3 dans les cellules RINm5F intactes. Lorsque les cellules RJNm5F ont été prétraitées au PMA, leur relâche de Ca[indice supérieur 2+] induite par le carbachol, un agoniste du récepteur muscarinique, a été significativement diminuée. Dans des études de spectrofluorométrie avec des cellules RINm5F perméabilisées à la saponine, nous avons directement montré que la phosphorylation de IP[indice inférieur 3]R-3 par la PKC diminue de 40% la relâche de Ca[indice supérieur 2+] induite par l'IP[indice inférieur 3]. Ces résultats suggèrent l'existence d'un mécanisme de régulation dans la voie de signalisation calcique par lequel la PKC diminue l'activité de l'IP[indice inférieur 3]R-3. Ce mécanisme de régulation négative permettrait de protéger les cellules RINm5F contre les effets nocifs provoqués par des augmentations prolongées de Ca[indice supérieur 2+]. Malgré leur similitude au niveau structurel et fonctionnel, les trois isoformes d'IP[indice inférieur 3]Rs manifestent des différences notables. La réponse calcique peut se traduire par une panoplie de patrons différents (réponse transitoire, oscillations). Ces différences nous portent à croire que chaque isoforme remplit un rôle qui lui est propre dans la cellule. Afin d'étudier l'importance fonctionnelle de chaque isoforme, le deuxième objectif de mon programme de recherche a été de mesurer leur implication dans l'activation de NFAT, un facteur de transcription dont l'activation est directement reliée aux variations de Ca[indice supérieur 2+] intracellulaire ce qui implique directement les IP[indice inférieur 3]Rs. Dans cette deuxième partie du travail, nous avons montré que la stimulation des cellules HEK-293 avec une dose sous-maximale de carbachol, produit une réponse de type oscillatoire. L'invalidation deIP[indice inférieur 3]R-2 par l'approche d'ARN interfèrent provoque des réponses calciques beaucoup plus faibles et change le patron de signalisation calcique (réponse de type transitoire). L'utilisation de gènes rapporteurs a monté que l'invalidation de IP[indice inférieur 3]R-2 a pour conséquence de diminuer drastiquement l'activité de NFAT dans les cellules HEK-293. Nos résultats montrent que le déficit en IP[indice inférieur 3]R-2 menant à une plus faible réponse calcique et à une incapacité de produire des oscillations calciques mène à une très faible activation de NFAT dans les cellules HEK-293. | fr |
