Développement d'une nouvelle stratégie protéomique différentielle pour identifier des protéines modifiées par des métabolites réactifs de l'acide tiénilique (TA) chez le rat

Abstract

Avant d'être mis sur le marché, les médicaments font l'objet d'études pré-cliniques et cliniques approfondies qui visent à vérifier leur innocuité. Il ne fait aucun doute que cette mesure rend ces produits beaucoup plus sûrs. Il arrive néanmoins que des produits s'avèrent présenter un risque de toxicité inacceptable après avoir été mis sur le marché (LASSER et al. , 2002). Les mécanismes mis en jeu dans ce phénomène de toxicité demeurent complexes et parfois intriqués. L'hépatotoxicité est incomplètement prévisible avant la vente d'un tel médicament et ce n'est qu'une large utilisation de celui-ci qui permettra de la mettre en évidence. En 1985 plus de 600 drogues étaient toxiques pour le foie (STRICKER et al. , 1985) celles-ci incluant les anti-inflammatoires non stéroïdiens, les antibiotiques etc.. (BOELSTERLI.,93; ZIMMERMAN 1990 et 2000). À l'heure actuelle ce problème socio-économique persiste malgré les efforts sur la pharmacovigilance déployés par les différentes compagnies pharmaceutiques. Ce phénomène illustre une nouvelle fois les limites des essais cliniques en matière de détection d'interactions ou d'effets indésirables des médicaments. L'ensemble de ces données nous laisse croire qu'il existe aujourd'hui très peu de méthodes d'analyse sensibles pour détecter et déterminer les mécanismes fondamentaux impliqués dans l'apparition ou le développement de ces maladies. D'où le but de notre projet qui est de développer une stratégie protéomique afin de caractériser et identifier des protéines modifiées par les métabolites des médicaments en général et en particulier des protéines hépatiques du rat modifiées par les métabolites actifs du ticrynafen (TA). TA était un puissant anti-hypertenseur qui fut retiré du marché en raison de l'hépatite autoimmune à caractère idiosyncrasique qu'il causait (POUPON et al. 1980) chez certaines personnes (HOMBERG et al. 1985). La stratégie protéomique utilisée dans cette étude consacrée aux rats traités préalablement ou non avec TA sera basée sur une approche concentrée sur des méthodes à haut pouvoir de séparation des protéines par électrophorèse en deux dimensions (2D). Les protéines séparées seront alors électrotransférées sur PVDF (polyvinyl difluoride) par immunobuvardage de type western. L'immunodétection sera utilisée comme méthode spécifique de détection des protéines modifiées par TA en utilisant des anticorps (Ac) anti-TA. Le spectromètre de masse sera ici l'outil de choix pour l'analyse rapide des protéines isolées. Au terme de cette étude nous avions pu obtenir des résultats assez reproductibles nous permettant d'identifier plusieurs protéines supposément être modifiées par TA et qui sont impliquées dans certaines fonctions vitales de la cellule. Nous espérons que les progrès fantastiques de la spectrométrie de masse en tandem sur la connaissance précise des cibles antigéniques et sur l'identification de cibles protéiques modifiées pourront peut-être répondre dans un avenir proche à ce nouveau challenge. Un défi qui est d'élargir notre compréhension sur des mécanismes physiopathologiques impliqués dans l'hépatoxicité médicamenteuse et qui aura un impact sur leur diagnostic, leur suivi et leur traitement.