Caractérisation fonctionelle [i.e. fonctionnelle] du récepteur AT4 dans les cellules endothéliales d'aorte de boeuf

Abstract

Des études récentes ont caractérisé le récepteur AT[indice inférieur 4], un site de liaison spécifique pour le fragment carboxy-terminal de l'angiotensine II (Ang IV). Dans la présente étude, nous avons trouvé un indice de fonctionnalité du récepteur AT[indice inférieur 4] en évaluant sa capacité d'internalisation dans les cellules endothéliales d'aorte de boeuf (CEAB). Les CEAB internalisent efficacement l'[indice supérieur 125]I-Ang IV, tel qu'évalué par la liaison résistante à l'acide. L'internalisation d'[indice supérieur 125]I-Ang IV est considérablement diminuée en présence de sucrose hyperosmolaire ou en présence de monensine ou de NH[indice inférieur 4]Cl. Environ 50% de l'[indice supérieur 125]I-Ang IV internalisée est recyclée dans le milieu extracellulaire durant une incubation de 2 h à 37[degrés]C. L'[indice supérieur 125]I-Ang IV demeure intacte durant tout le processus d'internalisation/recyclage. L'Ang IV ne se dissocie pas de son récepteur AT[indice inférieur 4], en dépit de l'environnement acide des endosomes. Tel qu'attendu, l'internalisation de l'[indice supérieur 125]I-Ang IV a été complètement abolie par le divalinal-Ang IV, un antagoniste du récepteur AT[indice inférieur 4]. De façon intéressante, l'[indice supérieur 125]I-divalinal-Ang IV n'est pas internalisé dans les CEAB. Ces résultats suggèrent que le récepteur AT[indice inférieur 4] subit un processus d'internalisation/recyclage agoniste-dépendant habituellement observé suite à l'activation de récepteurs fonctionnels. Nous avons identifié le mécanisme par lequel l'Ang IV induit l'expression du gène de l'inhibiteur de l'activateur du plasminogène (PAI-1) dans les CEAB. Nous avons d'abord confirmé par les méthodes de RT-PCR et immunobuvardage Northern que l'Ang IV augmente l'expression du gène du PAI-1. La staurosporine et la chélérythrine, des inhibiteurs de la PKC, ont complètement aboli l'expression du gène du PAI-1. Le PMA, un activateur connu de la PKC, a augmenté de 6.5 fois l'expression du gène du PAI-1 induite par l'Ang IV. La génistéine et la tyrphostine, des inhibiteurs des tyrosine kinases, ont considérablement diminué l'effet de l'Ang IV. En présence de wortmannine, un inhibiteur de la PI3-kinase, il y a aussi eu diminution de l'expression du gène PAI-1 induite par l'Ang IV. Le U0126, un inhibiteur des MAP kinases, a également diminué partiellement l'expression du gène PAI-1 induite par l'Ang IV. Ces résultats suggèrent donc que la PKC, certaines tyrosines kinases, la PI3-kinase et les MAP kinases seraient impliquées dans l'expression du gène du PAI-1 induite par l'Ang IV. Ces voies de signalisation sont compatibles avec le fait que l'Ang IV utilise un mécanisme apparenté à celui des facteurs de croissance ou des cytokines.