Show simple document record

dc.contributor.advisorEscher, Emanuelfr
dc.contributor.authorPérodin, Jacquelinefr
dc.date.accessioned2014-05-16T14:57:08Z
dc.date.available2014-05-16T14:57:08Z
dc.date.created2000fr
dc.date.issued2000fr
dc.identifier.isbn0612618609fr
dc.identifier.urihttp://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4132
dc.description.abstractDepuis quelques années, l'identification des sites d'interaction ligand-récepteur se fait par de la mutagenèse dirigée et de la modélisation moléculaire. Dans cette étude, nous avons premièrement évalué des analogues de l'angiotensine II (AngII) contraints en positions 5-7 sachant que la position 8 de l'AngII est importante pour l'activation du récepteur de l'angiotensin [i.e. angiotensine] de type 1 (AT[indice inférieur 1]). Ces résultats ont démontré que l'AngII favorise une conformation linéaire lors de sa liaison au récepteur AT[indice inférieur 1]. Par la suite, nous avons utilisé la méthode de marquage par photoaffinité afin d'identifier directement les sites de contact de la position 8 de l'AngII avec le récepteur AT[indice inférieur 1] humain (hAT[indice inférieur 1]). Le photomarquage de hAT[indice inférieur 1] par le [indice supérieur 125] I-[Bpa[indice supérieur 8]]AngII nous a révélé une glycoprotéine ayant une masse moléculaire apparente de 109 kDa suite à une analyse par SDS-PAGE. Le clivage chimique de ce complexe par le bromure de cyanogène a produit un fragment de 7.5 kDa qui correspond aux acides aminés Pro[indice supérieur 285] ~Met[indice supérieur 334]. Ce dernier fragment inclut une portion du 7ième domaine transmembranaire (DTM) ainsi qu'une partie de la queue C-terminale du récepteur hAT[indice inférieur 1]. La digestion enzymatique de ce fragment par l'Endoprotéinase Lys-C a produit un fragment de 4.2 kDa qui correspond aux acides aminés Pro[indice supérieur 285] ~Lys[indice supérieur 307]. Le radioséquençage du fragment de 7.5 kDa (Pro [indice supérieur 285] ~Met [indice supérieur 334]) a démontré que le 125 I-[Bpa[indice supérieur 8]]AngII interagit avec la Phe[indice supérieur 293] et l'Asn[indice supérieur 294] dans le 7ième DTM du récepteur hAT[indice inférieur 1]. La mutation de la Phe[indice inférieur 293] pour une Met a eu peu d'effet sur l'affinité et la fonctionnalité du récepteur hAT[indice inférieur 1] . Cependant, la mutation de l'Asn[indice supérieur 294] pour une Met a légèrement diminué l'affinité de l' [indice supérieur 125]I-AngII pour son récepteur (K D N294M-hAT[indice inférieur 1] = 1.3 « 0.10 nM vs K D hAT 1 = 0.47 « 0.4 nM) mais a généré un récepteur mutant incapable de produire des inositols phosphates suite à une stimulation par l'AngII donc un récepteur non-fonctionnel. En utilisant un récepteur constitutivement actif du récepteur hAT[indice inférieur 1] , soit le N111G-hAT[indice inférieur 1], nous avons déterminé que le [indice supérieur 125]I-[Bpa[indice supérieur 8]]AngII ne pouvait pas détecter un changement conformationnel dans la région du 7ième DTM lors du passage de l'état inactif vers un état actif. En général, nos résultats indiquent que le côté C-terminal de l'AngII interagit avec la Phe[indice supérieur 293] et l'Asn[indice supérieur 294] et que l'Asn[indice supérieur 294] est impliqué dans le mécanisme d'activation du récepteur hAT[indice inférieur 1].fr
dc.language.isofrefr
dc.publisherUniversité de Sherbrookefr
dc.rights© Jacqueline Pérodinfr
dc.titleÉtude conformationnelle de l'angiotensine II et du récepteur AT[indice inférieur 1] humainfr
dc.typeThèsefr
tme.degree.disciplinePharmacologiefr
tme.degree.grantorFaculté de médecine et des sciences de la santéfr
tme.degree.levelDoctoratfr
tme.degree.namePh.D.fr


Files in this document

Thumbnail

This document appears in the following Collection(s)

Show simple document record