Rôles et mécanismes d'action du récepteur AT [indice 2] de l'angiotensine II dans la différenciation des cellules NG108-15

Abstract

L'Ang II possède plusieurs sous-types de récepteurs dont les mieux caractérisés sont les récepteurs AT<SUB>1</SUB> et AT<SUB>2</SUB>. Le récepteur AT<SUB>1</SUB> contrôle les fonctions cardio-vasculaires et l'homéostasie des fluides, il est également impliqué dans la croissance cellulaire notamment au niveau des cellules de muscles lisses vasculaires. Contrairement au récepteur AT<SUB>1</SUB>, le rôle et les mécanismes d'action du récepteur AT<SUB>2</SUB> ne sont pas encore clairement définis. Il est entre autre associé à l'inhibition de la prolifération (action antagoniste aux récepteurs AT<SUB>1</SUB>), à la régénération ainsi qu'à l'apoptose de différents types cellulaires. Il contrôlerait également la soif et la relâche de vasopressine. L'observation de l'expression massive et transitoire des récepteurs AT<SUB>2</SUB> dans le cerveau au cours du développement a amené l'hypothèse que ce récepteur pourrait être impliqué dans le développement neuronal. Mon projet de recherche a porté sur l'étude des mécanismes d'action du récepteur AT<SUB>2</SUB> ainsi que de son rôle possible dans la différenciation morphologique neuronale des cellules NG108-15. Ces cellules sont un hybride de neuroblastomes de souris et de gliomes de rat. Elles n'expriment que des récepteurs AT<SUB>2</SUB> lorsqu'elles sont non-différenciées et les deux sous-types de récepteurs, AT<SUB>1</SUB> et AT<SUB>2</SUB>, lorsque différenciées au dbAMPc ou traitées pendant 3 jours à l'Ang II. Nos résultats ont démontré qu'un traitement de trois fours à l'Ang II induit une élongation neuritique caractérisée par une augmentation de la quantité de microtubules et par augmentation de MAP2c associée à ces microtubules, sans modification des niveaux d'association de tau. Ainsi, l'Ang II via son récepteur AT<SUB>2</SUB> potentialise la différenciation des cellules NG108-15 au dbAMPc. Par contre, l'activation des récepteurs AT<SUB>1</SUB> inhibe l'élongation neuritique induite par faction du récepteur AT<SUB>2</SUB>. Concernant la signalisation du récepteur AT<SUB>2</SUB> nous avons d'abord observé que l'activation des récepteurs AT<SUB>2</SUB> amène une augmentation de l'activité GTPasique membranaire sans implication de protéines G hétérotrimériques. Vu l'implication de p21^ras dans les mécanismes d'action des facteurs de croissance nous avons vérifié son recrutement possible par le récepteur AT<SUB>2</SUB>. L'Ang II inhibe l'activité de p21^ras après 10 min de traitement. L'activation du récepteur AT<SUB>2</SUB> mène également une augmentation des niveaux de phosphorylation sur résidus tyrosine de plusieurs protéines causée par l'inhibition de phosphotyrosine phosphatases. Cette augmentation de la phosphorylation sur résidus tyrosine peut être corrélée à une augmentation soutenue de l'activité des MAPK, ERK1 et ERK2. L'utilisation de l'inhibiteur des MEK, le PD98059, a permis de démontrer que l'activation des MAPK est essentielle à l'élongation poussée neuritique stimulée par le récepteur AT<SUB>2</SUB>. Bien que MAP2 soit un substrat des MAPK, nos résultats n'ont pas permis de démontrer de variation des nivaux de phosphorylation de MAP2c après stimulation à l'Ang II. Reproduisant le modèle neuronal, les cellules NG108-15 synthétisent de l'Ang II de façon endogène. Des analyses Southern des produits de RTPCR des constituants du système rénine-angiotensine présents dans les cellules NG108-15 nous ont permis de démontrer l'origine neuronale de la rénine et l'origine gliale de l'AOGEN et de l'ACE. Ces résultats amènent des précisions sur la contribution neuronale et gliale dans la synthèse de l'Ang II au niveau du cerveau.