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dc.contributor.advisorPayet, Marcel-Danielfr
dc.contributor.advisorDupuis, Gillesfr
dc.contributor.authorRicard, Isabellefr
dc.date.accessioned2014-05-16T14:56:57Z
dc.date.available2014-05-16T14:56:57Z
dc.date.created1997fr
dc.date.issued1997fr
dc.identifier.isbn0612357767fr
dc.identifier.urihttp://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4102
dc.description.abstractL'importance des interactions VLA-4/VCAM-1 lors de la migration des lymphocytes laissait suggérer que celles-ci pouvaient transmettre la signalisation requise pour l'extravasion subséquente des lymphocytes. Nous avons donc étudié les événements biochimiques ainsi que la modulation qui suivent une telle interaction. Nous avons montré que la liaison de VLA-4 avec un Ac réticulé anti-[alpha]4 résulte en une réponse Ca[indice supérieur 2+] biphasique chez les populations de lymphocytes T Jurkat (115 [plus ou moins] 16 nM) et périphériques (24 [plus ou moins] 7 nM). La Fn et son fragment CS-1 (V25) sont également capables de déclencher une réponse Ca[indice supérieur 2+] soutenue chez environ 50% des cellules Jurkat. De même, l'occupation de VCAM-1 chez les cellules endothéliales ECV304 génère une augmentation de la [Ca[indice supérieur 2+]]i soutenue de 140 nM [plus ou moins] 21 nM. De plus, l'occupation de VLA-4 chez les cellules Jurkat ou de VCAM-1 chez les cellules ECV304 stimule la production de myo-inositol 1,4,5-trisphosphate d'environ 2,4 [plus ou moins] 0,02 fois (par rapport au témoin) dans le cas des cellules Jurkat et de 3,9 [plus ou moins] 0,6 fois (par rapport au témoin) dans le cas des cellules endothéliales ECV304. Enfin, les cellules ECV304 induisent une réponse Ca[indice supérieur 2+] biphasique chez des lymphocytes Jurkat chargés en Fura2 (218 [plus ou moins] 16 nM), tandis qu'une réponse Ca[indice supérieur 2+] transitoire est observée lorsque des lymphocytes Jurkat sont ajoutés à des cellules ECV304 chargées en Fura2 (262 [plus ou moins] 12 nM). Les réponses Ca[indice supérieur 2+] obtenues dans ces expériences impliquent des interactions VLA-4/CAM-1 puisqu'elles sont réduites par un pré-traitement des cellules cibles avec l'Ac monoclonal approprié. Un contact étroit est nécessaire entre les lymphocytes Jurkat et les cellules ECV304 afin de générer la signalisation Ca[indice supérieur 2+]. Nos résultats suggèrent que les molécules d'adhésion VLA-4 et VCAM-1 peuvent transmettre un signal qui implique l'activation de la voie des phosphoinositides et la mobilisation du Ca[indice supérieur 2+]. Afin de comprendre le processus de déadhésion permettant aux lymphocytes de subir la migration trans- et sub-endothéliale les conduisant jusqu'au site d'inflammation, nous avons utilisé l'imunofluorescence indirecte et la microscopie confocale pour étudier le devenir de VCAM-1 chez les cellules endothéliales ainsi que VLA-4 chez les lymphocytes T. Nos résultats montrent que VCAM-1 est rapidement internalisé (14,5 min pour obtenir 50% d'internalisation). Le processus de déadhésion est inhibé en déplétant les cellules en ATP, en diminuant la [Ca[indice supérieur 2+]]i et en désorganisant le réseau de microfilament et de microtubule. En plus, des inhibiteurs de la PKC et des tyrosine kinases abolissent l'internalisation. L'internalisation implique la voie dépendante de la clathrine basé [i.e. basée] sur les observations que (1) l'internalisation de VCAM-1 est inhibée chez les cellules traitées avec des agents lysosomotropiques ou avec une concentration hypertonique de sucrose connue pour dissocier les protéines adaptatrices des vésicules recouvertes de clathrine et (2) VCAM-1 internalisé est colocalisé avec la clathrine. Par contre VLA-4 demeure à la surface des lymphocytes T Jurkat et périphériques. Nous avons également déterminé si l'occupation de VLA-4 chez les lymphocytes Jurkat et de VCAM-1 chez les cellules ECV304 pouvaient [i.e. pouvait] entraîner des changements morphologiques des filaments d'actine. Nos résultats montrent clairement que l'occupation de VLA-4 chez les cellules Jurkat provoque un changement de la F-actine caractérisée par un amincissement général de la structure près de la membrane plasmique ainsi qu'une grande formation de pseudopodes. La liaison de VCAM-1 chez les cellules ECV304 provoque des changements importants dans l'apparence morphologique de la F-actine. Les fibres de stress caractéristiques ont disparue [i.e. disparu] et ont été remplacées par des agrégats diffus de F-actine, distribués dans le cytoplasme. On retrouve également des régions condensées d'actine au niveau de la membrane plasmique. L'interaction entre les cellules Jurkat et ECV304 induit un changement morphologique de la F-actine. Chez les cellules ECV304, la F-actine en périphérie ne semble pas modifiée mais les fibres de stress sont remplacées par de petits filaments, suggérant que les cellules Jurkat induisent une dépolymérisation de la F-actine. Dans le cas des cellules Jurkat, le contact avec les cellules ECV304 induit la formation de pseudopodes. Nos résultats sont en accord avec un modèle où VCAM-1 participerait initialement dans la rétention des cellules T à l'endothélium en se liant à VLA-4. La déadhésion des lymphocytes serait facilitée par l'internalisation de VCAM-1. L'expression continue de VLA-4 à la surface cellulaire pourrait permettre aux cellules T en migration d'interagir et de recevoir des signaux du ligand Fn de la matrice extracellulaire. De plus, la signalisation induite par l'interaction VLA-4/VCAM-1 entraînerait ultimement un changement morphologique du cytosquelette chez les lymphocytes Jurkat et les cellules endothéliales ECV304, nécessaire à l'extravasation des lymphocytes au site d'inflammation."--Résumé abrégé par UMI.fr
dc.language.isofrefr
dc.publisherUniversité de Sherbrookefr
dc.rights© Isabelle Ricardfr
dc.titleSignalisation et modulation de l'intégrine lymphocytaire VLA-4 et de son contre récepteur endothélial VCAM-1fr
dc.typeThèsefr
tme.degree.disciplineBiochimiefr
tme.degree.grantorFaculté de médecine et des sciences de la santéfr
tme.degree.levelDoctoratfr
tme.degree.namePh.D.fr


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