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dc.contributor.advisorRoux, Sophiefr
dc.contributor.authorMcManus, Stephenfr
dc.date.accessioned2014-05-16T12:49:07Z
dc.date.available2014-05-16T12:49:07Z
dc.date.created2010fr
dc.date.issued2010fr
dc.identifier.isbn9780494837580fr
dc.identifier.urihttp://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4077
dc.description.abstractIl a été démontré dans notre laboratoire que les ostéoclastes ( OCLs) provenant de patients atteints de myélome multiple (MM) présentaient une variation de l'expression des récepteurs de TRAIL en comparaison avec des ostéoclastes normaux. Il a également été montré que TRAIL (TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand), un membre de la famille TNF, était capable d'induire l'apoptose des cellules exprimant ses récepteurs, en liant les récepteurs DR4 et DRS, mais pas DcRl et DcR2, qui sont des récepteurs "decoy", dont le domaine intracellulaire de mort est absent. La modulation observée de ces récepteurs pourrait créer une résistance à l'apoptose dans le microenvironment du MM et pourrait être associée au profil cytokinique de cette maladie, caractérisé par une forte expression du « Receptor Activator of NF-KB Ligand" (RANKL) et de "Macrophage Inflammatory Protein lei' (MIP-la), cytokines majeures de la résorption osseuse. Le but de notre étude a été de déterminer quelles cytokines présentes dans cette pathologie pourraient en être responsables. Lors de la maturation cellulaire, les précurseurs d'OCL provenant de sang cordon et mis en présence de M-CSF et RANKL se différencient en cellules multinucléées (MNCs) qui expriment des marqueurs OCL et sont capables de résorber l'os. Par immunocytochimie, il avait été montré que ces cellules OCL exprimaient les 4 récepteurs de TRAIL. En stimulant de telles cultures d'OCLs avec différentes cytokines (RANKL, MIP-la, Transforming Factor (3 (TGF-{3), osteoprotegerin (OPG), TRAIL) et la parathormone (PTH), nous avons observé une modulation de l'expression de ces récepteurs de TRAIL, au niveau mARN par RT-PCR, au niveau protéique par immunobuvardage de type western et au niveau de la membrane cellulaire par immunocytochimie. Afin de voir si ces changements conduisaient à une modulation du niveau de résistance à l'apoptose, des MNCs, cultivées en présence de ces différentes cytokines pendant 5 jours, ont été stimulées avec TRAIL pendant 24h. L'apoptose des OCLs a été évaluée par la méthode TUNEL. Aucune corrélation n'a pu être établie entre la modification de l'expression de ces récepteurs et le niveau d'apoptose, mais le nombre d'expériences est encore trop faible pour conclure, et de nouvelles expériences doivent être réalisées afin de pouvoir analyser cette corrélation de manière adéquate. Nos résultats suggèrent néanmoins la possibilité qu'une modulation des récepteurs de TRAIL à la surface des OCLs soit induite par certaines cytokines fortement exprimées dans les maladies osseuses avec hyperrésorption osseuse, et puisse ainsi induire une résistance à l'apoptose de ces cellules. En prolongeant la vie des OCLs, ces influences régulatrices pourraient rendre compte en partie de l'augmentation de la résorption dans le micro environnement osseux des maladies comme l'ostéoporose, la maladie de Paget, ou le myélome multiple.fr
dc.description.abstractAbstract: We have previously shown that osteoclasts (OCLs) from multiple myeloma (MM) specimens vary from healthy OCLs in their expression of the TRAIL receptors. TRAIL (TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand), a member of the TNF superfamily, has been shown to induce apoptosis in cells by binding receptors DR4 and DR5, but not DcR1 and DcR2, its decoy receptors, which lack the necessary internal death domain. The observed modulation of these receptors may confer a resistance to apoptosis in the MM environment, and could be related to the cytokine pattern that primarily involves the resorption promoting Receptor Activator of NF-[kappa]B Ligand (RANKL) and Macrophage Inflammatory Protein 1 (MIP-1[alpha]). The aim of our study was to determine which cytokines present in the disease might be responsible for this modulation. In long term cultures of OCL precursors from cord blood in the presence of M-CSF and RANKL, multinucleated cells (MNCs) that express OCL markers form, and can resorb bone. Through immunocytochemistry we showed that these MNCs can express all four TRAIL receptors. By stimulating with various cytokines (RANKL, MIP-1[alpha], Transforming Factor [bêta] (TGF[bêta]), osteoprotegerin (OPG), TRAIL), and parathyroid hormone (PTH) in OCL cultures, we were able to observe receptor modulation at the mRNA level using real time PCR, the protein level using Western blot analysis, and cell surface expression via immunocytochemistry. To determine if these changes translated to a difference in resistance to apoptosis, cells treated with [with] apoptosis-inducing levels of TRAIL after 5 days of stimulation with the selected cytokines were evaluated via TUNEL to quantify apoptosis. While no correlation has yet been established between the observed receptor modification and apoptosis induction, sample size is a factor, and further tests will be performed. Our results suggest the possibility that TRAIL receptor modification is induced by multiple cytokines present in bone diseases, capable of altering both the susceptibility and resistance pathways in osteoclasts. By potentially prolonging the lifespan of the OCL, these regulatory influences may ultimately be contributory factors to the augmentation of resorption in the micro-environment of bone resorptive diseases like multiple myeloma, Paget's disease of bone, or osteoporosis.en
dc.language.isoengfr
dc.publisherUniversité de Sherbrookefr
dc.rights© Stephen McManusfr
dc.subjectTRAILfr
dc.subjectResorptionfr
dc.subjectApoptosefr
dc.subjectOsteoclastefr
dc.titleModulation of tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand (trail) receptors in a human osteoclast model in vitrofr
dc.typeMémoirefr
tme.degree.disciplineImmunologiefr
tme.degree.grantorFaculté de médecine et des sciences de la santéfr
tme.degree.levelMaîtrisefr
tme.degree.nameM. Sc.fr


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