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Implication du récepteur purinergique P2Y[indice inférieur 6] dans l'expression et la relâche de la chimiokine CXCL8 des cellules épithéliales lors de l'inflammation intestinale

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Grbic_Djordje_MSc_2007.pdf (15.39Mb)
Publication date
2007
Author(s)
Grbic, Djordje
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Abstract
En condition normale, les récepteurs P2Y[indice]2,4 et [indice]6 sont impliqués dans la sécrétion et l'absorption des électrolytes par l'intestin. Par contre, leurs fonctions en condition pathologique, telles que dans les maladies inflammatoires de l'intestin (MII), ne sont pas connues. Nous avons donc étudié l'impact des MII sur l'expression des récepteurs P2Y et leurs rôles dans la réponse immune des cellules épithéliales intestinales (CEI). Les effets de l'inflammation sur l'expression des P2Y ont été déterminé par PCR, in vivo , à partir de côlon isolé d'un modèle murin de colite et d'échantillons d'intestins humains de patients atteints de MII et in vitro par l'utilisation de cytokines pro-inflammatoires ajoutées à des CEI en culture. La présence des nucléotides extracellulaires, en particulier l'UDP, a été vérifiée dans le milieu de culture des cellules Caco-2/15 en conditions inflammatoires par RP-HPLC. Par puce d'anticorps, nous avons mesuré l'influence de la stimulation des cellules Caco-2/15 par l'UTP (P2Y[indice]2 ) et l'UDP (P2Y[indice]6 ) sur la sécrétion des cytokines, CXCL8 en particulier. La sécrétion de CXCL8 a été quantifiée par la méthode d'ELISA. Les cellules Caco-2/15 ont par la suite été transfectées par lipofection avec le promoteur minimal de CXCL8 couplé au gène de la luciférase et les cellules stimulées à l'aide des différents agonistes des P2YR en présence ou non de différents antagonistes. La caractérisation des voies de signalisation impliquées dans l'expression de CXCL8 fut déterminée à l'aide d'inhibiteurs pharmacologiques pour ERK1/2, p38 et JNK. Dans cette étude nous avons démontré que l'expression des récepteurs P2Y[indice]2 et P2Y[indice]6 était augmentée en condition de MII et que le P2Y[indice]6 stimule l'expression et la sécrétion de CXCL8 par les CEI par un mécanisme impliquant principalement la voie ERK 1/2. Ces résultats démontrent clairement l'implication du récepteur P2Y[indice]6 dans la réponse immune de l'épithélium intestinal lors de MII.
URI
http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3938
Collection
  • Médecine et sciences de la santé – Mémoires [1533]

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