Modification pharmacologique de l'environnement calcique et du pH acide du système trans-Golgi network/endosomes afin d'inhiber la maturation du pro-TGF[bêta]1

Abstract

La fibrose pulmonaire idiopathique (FPI) est une maladie chronique et progressive où aucun traitement efficace n'existe à jour.La FPI se définit comme un désordre épithéliale-fibroblaste caractérisé par la présence excessive de facteurs profibrotiques dont majoritairement du facteur de croissance tumorale de type [bêta]1 (TGF[bêta]1) qui entraîne des effets néfastes importants au niveau de la production de matrice extracellulaire. Le TGF[bêta]1 est une cytokine 'homodimérique de 25 kDa qui est initialement synthétisée à partir d'un précurseur nommé pré-pro-TGF[bêta]1. Suite au clivage du peptide signal, le précurseur est clivé au site [indice supérieur 275]Arg-His-Arg-Arg[indice supérieur 278] par la furine, une enzyme de la famille des sérines protéases lors de son passage dans le trans-Golgi network (TGN). Puisque la furine est impliquée dans la maturation du TGF[bêta]1 et que cette enzyme requiert la présence de calcium et d'un pH acide dans le TGN pour la maturation de ses substrats, nous avons étudié l'effet d'agents modifiant l'environnement calcique à pH acide du système TGN/endosomes sur la diminution de la maturation du TGF[bêta]1. Par buvardage de type Western à l'aide d'un anticorps neutralisant dirigé contre le précurseur complet du TGF[bêta]1 (50 kDa) et la pro-région LAP (40 kDa), nous avons observé que la modification du pH du TGN suite à l'incubation de la lignée cellulaire épithéliale alvéolaire A549 avec la bafilomycine, le NH[indice inférieur 4]Cl et la monensine diminuait la maturation du pro-TGF[bêta]1. De plus, un dosage antigénique (ELISA) du TGF[bêta]1 a permis de montrer que cette diminution de la maturation causait ainsi une diminution du niveau de TGF[bêta]1 mature retrouvé dans le milieu extracellulaire des cellules A549. De façon similaire, nous avons montré que des médicaments (le la classe des anti-malariens (chloroquine, hydroxychloroquine, azithromycine et amodiaquine), considérés comme des bases faibles, avaient la capacité de diminuer de façon significative la maturation et donc le niveau de TGF[bêta]1 mature des cellules A549 et des cellules gliales T98G de façon dose-dépendante. Par la suite, nous avons montré par buvardage de type Western et par ELISA que la modification de l'environnement calcique du TGN suite à l'exposition de la lignée cellulaire A549 avec les molécules A23187, EGTA et thapsigargine diminuait la maturation et donc le niveau de TGF[bêta]1 mature. De la même façon, nous avons observé que la doxycycline, un antibiotique de la classe (les tétracyclines connu pour être un chélateur de calcium, diminuait la maturation et le niveau de TGF[bêta]1 des cellules A549.