Les mutants de la préséniline 2 causant la maladie d'Alzheimer diminuent l'activité du récepteur à l'IP3 dans les cellules SH-SY5Y

Abstract

Le Ca[exposant 2+] est un important second messager régulant une grande variété de fonctions cellulaires incluant des réponses à court terme telles que la contraction et la sécrétion, et des réponses à long terme telles que la transcription de gènes, la division cellulaire et même l'apoptose. Chez les cellules non-excitables, les protéines responsables de l'élévation de Ca[exposant 2+] intracellulaire sont les récepteurs à l'IP[indice 3] , des canaux calciques situés sur le réticulum endoplasmique, et les TRPs, des canaux calciques situés sur la membrane plasmique. Il a été rapporté que les mutations dans les présénilines causant la maladie d'Alzheimer provoquaient un dysfonctionnement de la signalisation calcique dans plusieurs types de cellules. Les mécanismes précis par lesquels les présénilines mutantes associées à la maladie d'Alzheimer influencent l'activité des principales composantes de la signalisation calcique n'ont jamais été vérifiés.Le but de mon projet de maîtrise était donc de vérifier si la préséniline 2 peut altérer l'activité de l'IP[indice 3] R1, un élément important impliqué dans la relâche calcique neuronale. Pour ce faire, nous avons produit des lignées stables de cellules SH-SY5Y exprimant la préséniline 2 ou ses mutants. Les cellules SH-SY5Y expriment exclusivement l'IP[indice 3] R1. L'activité de l'IP[indice 3] R1 fut déterminée en mesurant la relâche de Ca[exposant 2+] par spectrofluorimétrie et l'intégrité de la protéine a été évaluée par immunoprécipitation et immunobuvardage. Nos résultats montrent que les mutants de la préséniline 2 causent une diminution de la relâche calcique dans les cellules SH-SY5Y stimulées au carbachol. Dans des cellules SH-SY5Y perméabilisées à la saponine, nous avons observé que cette diminution de la relâche calcique implique une diminution de l'affinité apparente de l'IP[indice 3] et aussi une diminution de la relâche maximale de Ca[exposant 2+] induite par l'IP[indice 3] . Nos études d'immunobuvardage ont montré que les mutants de la préséniline 2 diminuent l'expression de l'IP[indice 3] R1 chez les cellules SH-SY5Y. L'activité [gamma]-secrétase de ces mutants semble impliquée dans le phénomène, puisque ni le dominant négatif de la préséniline 2 ni la préséniline 2 de type sauvage ne causent un changement dans l'expression de l'IP[indice 3] R1. Nos résultats suggèrent que les mutants de la préséniline 2 causant la maladie d'Alzheimer diminuent l'affinité et aussi le niveau d'expression du récepteur à l'IP[indice 3] . Ces résultats supportent la notion qu'un dérèglement de l'homéostasie calcique pourrait être un événement primaire dans le développement de la maladie d'Alzheimer.