Rôle protecteur de la bradykinine chez les cellules endothéliales de la microcirculation cérébrale

Abstract

L'intégrité morphologique et fonctionnelle de la microcirculation est compromise dans de nombreux domaines de la pathologie cardiovasculaire tels l'hypertension, le diabètes, l'endotoxémie, etc. La contribution de différents facteurs cytotoxiques proapoptotiques tels le stress oxydant et les lipopolysaccharides, des molécules d'origine bactérienne, semble de plus en plus évidente dans la microangiopathie associée à ces pathologies. Par ailleurs, la bradykinine (BK) contribue en grande partie aux vertus bénéfiques des inhibiteurs de l'enzyme de conversion à l'angiotensine (IECA) et possiblement des antagonistes du récepteur AT-1 de l'Ang II (ARA) dans la thérapie des maladies cardiovasculaires. Nous avons émis l'hypothèse que la BK, via le récepteur B2, protège la viabilité de l'endothélium microvasculaire exposé à des inducteurs de mort cellulaire ceci, indépendamment de son effet antihypertenseur bien connu. Les objectifs de cette étude ont été de (1) valider la culture primaire de cellules endothéliales de microvaisseaux cérébraux porcins (CEMP) comme modèle cellulaire in vitro pour l'analyse des effets cytoprotecteurs de la BK, (2) déterminer in vitro les effets cytocides du H[indice 2] O[indice 2] (un simulateur de stress oxydant) et du LPS chez les CEMP en présence ou non de BK à l'aide du test colorimétrique utilisant le MTT, (3) détecter la présence de la caspase-3, du fragment actif de la calpaïne-2 et de l'[alpha]-spectrine clivée par immunobuvardage western (IW) dans les conditions décrites à l'objectif 2, (4) évaluer le taux d'expression (IW) de gènes pouvant être associés à la protection vasculaire induite par la BK et enfin, (5) étudier les effets modulateurs ex vivo de la BK sur la dégénérescence microvasculaire induite par le H[indice 2] O[indice 2] sur des sections d'explants de cerveaux de ratons au moyen d'une analyse densitométrique de la lectine-FITC. Les tests d'expression (RT-PCR, immunobuvardage western, liaison du radioligand [[exposant 3]H]BK) et d'activité (mobilisation calcique avec le fura-2AM) ont révélé la présence de récepteurs B2 fonctionnels chez les CEMP. Les résultats obtenus in vitro ont montré que les effets cytocides du H[indice 2] O[indice 2] et du LPS chez les CEMP ont été diminués significativement (30 et 53%, respectivement) par la BK; les effets protecteurs de la BK ont été contrés par l'administration concomitante de HOE 140, un antagoniste des récepteurs B2. La présence de la caspase-3 et de la calpaïne-2 ainsi que le clivage de l'[alpha]-spectrine (substrat de ces deux enzymes) ont été prévenus par la BK. De plus, l'activité et l'expression de certaines protéines cytoprotectrices (ex. MAPk-P, Akt-P, SOD) ont été augmentées en réponse à la BK. La BK s'est également montré efficace dans les essais ex vivo en réduisant de manière importante (45%) la dégénérescence microvasculaire provoquée par le H[indice 2] O[indice 2] . En conclusion, les résultats de cette étude suggèrent un nouveau rôle pour la BK dans la protection endothéliale microvasculaire. Nous proposons que les effets vasoprotecteurs de la BK contribuent en partie aux mécanismes d'actions complexes des IECA et des ARA ce qui pourrait expliquer leurs effets bénéfiques observés à long terme notamment, dans la prévention de la raréfaction microvasculaire associée à l'hypertension artérielle.