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Implication d'un motif dileucine de l'hélice VIII du récepteur de haute affinité du LTB[indice inférieur 4] dans la chimiotaxie du neutrophile dépendante de RhoA

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MR31409.pdf (3.760Mb)
Publication date
2007
Author(s)
Lambert, Karine
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Abstract
La chimiotaxie des leucocytes implique plusieurs évènements structurels et biochimiques bien organisés. Nous avons étudié les voies de signalisation intracellulaires menant à la migration des neutrophiles impliquant le récepteur de haute affinité du LTB[indice inférieur 4], le BLTI, ainsi que la relation structure-fonction de la huitième hélice alpha du récepteur dans la migration des neutrophiles. Des neutrophiles humains de même que la lignée cellulaire humaine pro-myéloide PLB-985 transfectée de façon stable avec l'ADNc du BLTI humain (PLB-BLT) ou des mutants de substitution de l'hélice 8 du BLTI et différenciée en type neutrophile ont été utilisés lors de cette étude. Tous les récepteurs mutés étaient exprimés à la membrane plasmique à un niveau similaire au récepteur BLTI de type sauvage, déterminé par cytométrie de flux. Les réponses chimiotactiques vers le LTB[indice inférieur 4] étaient similaires pour les PLB-BLT différentiés et les neutrophiles. Cependant, les réponses chimiotactiques des mutants de l'hélice 8 du BLTI vers le LTB[indice inférieur 4] étaient significativement réduites. Le prétraitement des cellules PLB-BLT différenciées et des neutrophiles avec la toxine de pertussis ou les inhibiteurs pharmacologiques de la P13K ou de pl60-ROCK réduisait leur migration vers le LTB[indice inférieur 4], indiquant l'implication de G[alpha][indice inférieur i], P13K et RhoA dans la chimiotaxie induite par le LTB 4 . Les neutrophiles et les PLB-BLT différenciés répondait au LTB[indice inférieur 4] en adoptant une morphologie polarisée, avec la F-actine dans un pseudopode situé au pôle avant et des complexes contractiles actine-myosine à l'arrière et aux côtés de la cellule.La stimulation de cellules PLB-BLT 2L(304-305)/A différentiées avec le LTB[indice inférieur 4] menait à une formation de multiples pseudopodes accompagnée par une perte de migration. Le phénotype de multiples pseudopodes se produisait aussi quand les cellules PLB-BLT étaient transfectées de façon transitoire avec un dominant négatif de RhoA ou prétraitées avec l'inhibiteur de p160-ROCK, Y-27632. Le défaut de migration observé chez les cellules PLB-BLT 2L(304-305)/A était corrigé par la transfection transitoire avec une forme constitutivement active de RhoA. En résumé, nos résultats suggèrent un rôle essentiel du motif dileucine distal de l'hélice 8 du BLT1 dans l'activation de RhoA et permettant la migration normale des neutrophiles induite par le LTB[indice inférieur 4.
URI
http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3881
Collection
  • Médecine et sciences de la santé – Mémoires [1603]

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