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dc.contributor.advisor[non identifié]fr
dc.contributor.authorFrancoeur, Nancyfr
dc.date.accessioned2014-05-16T12:48:15Z
dc.date.available2014-05-16T12:48:15Z
dc.date.created2007fr
dc.date.issued2007fr
dc.identifier.urihttp://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/3873
dc.description.abstractLes protéines de type TRPC ( transient receptor potential canonical ) forment les canaux ioniques responsables de l'entrée de calcium chez les cellules non excitables suite à la stimulation d'un récepteur couplé à une protéine Gq ou d'un récepteur de type tyrosine kinase. De récentes études ont mis en évidence l'association de certaines protéines avec ces canaux permettant leur modulation, tels la calmoduline, l'IP[indice inférieur 3]R, la cavéoline, etc. La partie C-terminale des TRPCs possède plusieurs motifs dont un domaine TRP, un domaine riche en proline, un domaine d'interaction pour la calmoduline et l'IP[indice inférieur 3]R ainsi qu'un domaine super hélice qui sont des sites d'interaction potentiels. Dans le but d'identifier des protéines qui interagissent avec ces motifs de la sous-famille de TRPC3, 6 et 7, nous avons produit des colonnes d'affinité où des protéines chimériques contenant les acides aminés Glu[indice supérieur 676] à Lys[indice supérieur 795] de TRPC3 ou Met[indice supérieur 725] à Arg[indice supérieur 931]" de TRPC6, fusionnées à la glutathione S-transférase (GST-CT3a et GST-CT6), ont été attachées sur des billes de glutathione-sépharose. Des protéines extraites de coeurs/poumons, de reins ou de cerveaux de souris, ou encore de lysats de cellules surexprimant de façon stable TRPC6, ont été incubées avec ces colonnes d'affinité.Les protéines retenues sur la colonne ont été éluées, séparées par SDS-PAGE, extraites du gel et digérées à la trypsine.Les extraits peptidiques obtenus ont été analysés par spectrométrie de masse grâce à un système nano-LC-ESI-TOF-MSMS. Nous avons identifié de cette façon 14 partenaires d'interaction potentiels des TRPCs, dont des protéines du cytosquelette, des chaperonnes, des protéines membranaires, des enzymes mithocondriales ainsi que d'autres protéines cytosoliques dont le rôle est plus ou moins bien connu. Deux de ces protéines ont capté notre intérêt soit la pompe à protons mitochondriale de type F[indice inférieur 0]F[indice inférieur 1] ainsi que le N -Ethylmaleimide-sensitive factor (NSF). Par des essais de liaison à la GST de type pull down, nous démontrons dans cette étude que NSF interagit directement avec TRPC3 et TRPC6, soit sans intermédiaire, et possiblement au niveau du domaine CIRB de ces canaux. Nous démontrons également, grâce à l'utilisation d'un dominant négatif de NSF, que cette protéine module l'entrée de Ca[indice supérieur 2+] par TRPC6, suite à la stimulation de la cellule au CCh, en plus de jouer un rôle dans la maturation du canal.fr
dc.language.isofrefr
dc.publisherUniversité de Sherbrookefr
dc.rights© Nancy Francoeurfr
dc.titleIdentification de nouveaux partenaires d'intéraction de TRPC3 et TRPC6 par spectrométrie de massefr
dc.typeMémoirefr
tme.degree.disciplinePharmacologiefr
tme.degree.grantorFaculté de médecine et des sciences de la santéfr
tme.degree.levelMaîtrisefr
tme.degree.nameM. Sc.fr


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