Caractérisation de B3, une séquence de l'ARN pré-messager de Bcl-x modulant l'épissage alternatif

Abstract

Bcl-x est un gène impliqué dans le processus de mort programmée de la cellule (apoptose) dont l'ARN pré-messager est épissé de façon alternative pour générer des isoformes ayant des activités opposées. Ainsi, les deux isoformes principaux Bcl-x[indice inférieur L] et Bcl-x[indice inférieur S] ont respectivement des activités anti- et pro-apoptotiques et sont produits à partir de deux sites d'épissage 5' en compétition. Un élément de 86 nucléotides nommé B3 est situé entre ces deux sites d'épissage et favorise la production de Bcl-x[indice inférieur L]. La dissection de B3 par mutagénèse dirigée a permis de cerner deux éléments distincts, AM2 et ML2 agissant comme enhancer pour le site d'épissage 5' de Bcl-x[indice inférieur L]. SRp30c, une protéine liant l'ARN connue pour son implication dans un nombre d'événements d'épissage alternatif, a été identifiée pour sa capacité à lier spécifiquement les éléments AM2 et ML2 par gel de retardement et pontage aux ultra-violets. L'implication de SRp30c dans le fonctionnement de l'élément B3 est soutenue par sa capacité à affecter l'épissage d'un minigène de Bcl-x suite à sa surexpression in vivo et à son ajout dans une réaction d'épissage in vitro. Un élément silencer, midAM, a également été identifié dans B3. On y a découvert deux sites d'épissage 5' cryptiques, x[indice inférieur M1] et x[indice inférieur M2] qui peuvent être utilisés, suite à l'inactivation du site d'épissage 5' authentique de Bcl-x[indice inférieur L] ou à la délétion combinée des enhancers AM2 et ML2, pour former de nouveaux isoformes de Bcl-x.