Synthèse et caractérisation d'un nouveau photomarqueur agoniste pour le récepteur humain AT[indice inférieur 1]

Abstract

Le Bpa et le p-N[indice inférieur 3]Phe sont présentement les principaux groupements photoactivables utilisés dans les études de photomarquage sur les GPCRs. Ces groupements présentent l'avantage d'être facilement accessibles; par contre, ils ont une sélectivité réactionnelle envers certains acides aminés. Au cours de cette étude, le 3,5-difluoro-4-azidophénylalanine fut synthétisé afin de remplacer le p-N[indice inférieur 3]Phe dans de nouvelles études de photomarquage. La présence des fluors évite théoriquement la sélectivité réactionnelle rencontrée chez le p-N[indice inférieur 3]Phe. Plusieurs voies synthétiques furent tentées avant d'obtenir le 5-difluoro-4-azidophénylalanine. Les molécules de départ utilisées lors des différentes synthèses étaient des noyaux aromatiques fluorés. La présence des fluors fut un désavantage majeur pour plusieurs synthèses où elle a causé la formation de produits incorrectement substitués. L'acide aminé final a été incorporé en position 8 de l'angiotensine II. Ce photomarqueur agoniste dont l'affinité est de l'ordre du nanomolaire fut utilisé en parallèle avec les photomarqueurs contenant le p-N[indice inférieur 3]Phe ou le Bpa en position 8 de l'angiotensine II. Les résultats obtenus, sur le récepteur humain AT[indice inférieur 1] , avec le photomarqueur contenant le p-N[indice inférieur 3]-F[indice inférieur 2]-Phe indiquent qu'il y a trois régions de contact dont l'une majoritaire se retrouvant dans le 6 ième domaine transmembranaire. Les deux autres régions de contacts se retrouvent dans la région du 3 ième et du 7 ième domaine transmembranaire. Ces résultats confirment ceux obtenus lors des études de"Methionine Proximity Assay" (MPA) sur hAT[indice inférieur 1] qui montraient la proximité de ces 3 domaines transmembranaires avec la position 8 de l'angiotensine II. Les résultats obtenus avec le photomarqueur contenant le p-N[indice inférieur 3]Phe sont identiques à ceux obtenus avec celui contenant le p-N[indice inférieur 3]-F[indice inférieur 2]-Phe. Des études plus approfondies devront donc être réalisées afin de s'assurer de l'absence de sélectivité réactionnelle du p-N[indice inférieur 3]-F[indice inférieur 2]-Phe. Pour ce faire, plusieurs photomarquages devront être réalisés dans des systèmes différents afin de s'assurer que les sites de contact ne soient pas toujours associés aux mêmes types d'acide aminé, ce qui serait un marqueur d'une sélectivité réactionnelle.