Développement d'outils proteomiques basés sur la spectrométrie de masse

Abstract

Comprendre comment une cellule réagit face à une condition comparativement à une autre est crucial. Afin de pouvoir faire ceci, des extraits cellulaires totaux ou des compartiments cellulaires peuvent être analysés par électrophorèse bidimensionnelle ou comparés en utilisant la chromatographie liquide bidimensionnelle couplée à un spectromètre de masse. Ces techniques sont utilisées pour étudier des mélanges complexes de protéines et comparer leur niveau d'expression, les modifications post-traductionnelles (comme la phosphorylation) et divers processus cellulaires. Dans cette étude, une technique a été développée, avec des protéines standard, afin de coupler l'immunobuvardage de type western avec la spectrométrie de masse directement au lieu d'utiliser un deuxième gel afin de pouvoir faire l'identification protéique. L'identification des protéines par 2D-LC-MS/MS sera utilisée en combinaison avec une colonne de cuivre afin de simplifier le mélange de peptides en sélectionnant seulement ceux qui possèdent des résidus histidine et/ou cystéine et d'identifier les protéines les moins abondantes.--Résumé abrégé par UMI.