Mechanisms of regulation of haptoglobin by C/EBPs

Abstract

Les cellules épithéliales intestinales participent à une réponse inflammatoire aiguë (RIA) lors de l'inflammation de l'intestin. Nous avons démontré que la RIA induit l'expression de gènes encodant les protéines de la réponse inflammatoire. La modulation de la synthèse d'une molécule pro-inflammatoire est une stratégie essentielle dans la régulation du processus inflammatoire caractéristique de plusieurs maladies comme les maladies inflammatoire intestinales. Il a été démontré que différents inhibiteurs comme les inhibiteurs du protéasome peuvent réprimer l'action de molécules pro-inflammatoires. Par exemple, le MG132 est un inhibiteur très spécifique de la dégradation protéique par le système biquitine/protéasome. MG 132 module négativement l'activation de gènes spécifiques impliqués dans la RIA via l'inhibition de NF-KB. La famille des facteurs de transcription C/EBP (CCAAT/enhancer binding protein) est aussi impliquée dans la régulation de gènes de réponse inflammatoire dans les cellules épithéliales intestinales. Dans cette étude, nous avons vérifié si MG132 modifie l'expression des cibles de C/EBP ou la stabilité des isoformes de C/EBP. Dans les cellules épithéliales intestinales, nous avons démontré par Northem blot que MG132 cause une diminution de l'induction IL-1 dépendante du gène encodant la protéine de la réponse inflammatoire haptoglobine. L'effet de MG132 sur l'expression de l'haptoglobine est transcriptionnel, tel que démontré par transfections transitoires. MG132 entraîne une augmentation de l'activité de liaison des C/EBPs à l'ADN au site consensus HaptoA ainsi qu'un changement dans la mobilité du complexe C/EBP, peut être dû à la formation d'une nouvelle forme de C/EBPf) de 26 kD. Cette forme paraît ne pas être le résultat d'un clivage causé par les caspases. Par des études de Western blot, nous avons montré que MG 132 entraîne une stabilisation des isoformes C/EBP.B et C/EBPô. Ces résultats suggèrent qu'en plus d'une modulation des gènes régularisés par NF-KB, MG132 peut diminuer l'expression des gènes régularisés par les C/EBPs. De plus, la stabilité de C/EBP{J et C/EBPô est contrôlée par une voie protéasomedépendante.

Abstract: Effect of the proteasome inhibitor MG132 on the inflammatory response in intestinal epithelial cells. Intestinal epithelial cells participate in the acute phase response (APR) during intestinal inflammation. We have shown that acute phase protein (APP) genes are induced during the intestinal APR. One way of repressing the activity of proinflammatory molecules is by the use of different inhibitors such as proteasome inhibitors. MG132 is a highly specific inhibitor of protein degradation via the ubiquitin/proteasome system and negatively modulates the activation of specific genes involved in the intestinal acute phase response via NF-[kappa]B inhibition. Effect of C/EBP[alpha] mutant overexpression on haptoglobin expression in intestinal epithelial cells. The transcription factor C/EBP[alpha] plays an important role in the regulation of haptoglobin expression in intestinal epithelial cells, but the specific regions involved in this regulation were unknown. To determine which regions of the C/EBP[alpha] isoform are involved in the control of haptoglobin expression, we generated IEC-6 rat intestinal epithelial cell lines stably expressing different C/EBP[alpha] mutants, by infection with the retroviral vector pBabepuro."--Résumé abrégé par UMI.