La méthode "SCAM" pour déterminer la topologie de l'enclave de liaison du récepteur AT1

Abstract

La méthode SCAM (substituded-cysteine accessibility method) a été utilisée pour identifier les acides aminés (a.a.) du VIIe domaine transmembranaire du récepteur AT[indice inférieur 1] formant l'enclave de liaison de l'AngII. Les résidus 286 à 295 ont été substitués un à la fois pour des cystéines (Cys) par mutagenèse dirigée. Les récepteurs AT[indice inférieur 1] (natif ou mutants) furent exprimés dans des cellules COS-7. Des études de liaison ont permis de déterminer que tous les mutants possédaient une affinité pour le [indice supérieur 125]I[Sar [indice supérieur 1] , Ile [indice supérieur 8 ]]AngII et un taux d'expression similaires [i.e. similaire] à ceux du récepteur AT[indice inférieur 1] natif (K[indice inférieur d] = 0.9 nM, B [indice inférieur max] = 1.1 pmol/mg) sauf le mutant I288C qui est exprimé à 0.2 pmol/mg. Pour déterminer la présence d'un a.a. dans l'enclave, les récepteurs natif [i.e. natifs] ou mutants ont été exposés aux méthanethiosulfonates (MTSEA, MTSET, MTSES, MTSBn)."--Résumé abrégé par UMI