Développement d'outils pour la production de ribozymes efficaces au niveau des plantes

Abstract

Le développement de ribozymes actifs in vivo comporte plusieurs étapes limitantes comme la sélection des sites, la livraison de ribozymes efficaces ainsi que la stabilité des ribozymes au niveau cellulaire. Pour la sélection des sites, nous avons procédé avec la méthode conventionnelle d'analyse des structures secondaires par ordinateur de l'ARN messager de la désoxygénase de Solanum chacoense suivi d'essais d'accessibilité par digestion avec la ribonucléase H. De plus, nous avons établi deux autres critères de sélection qui sont la présence de la séquence consensus de reconnaissance du ribozyme hammerhead au niveau des sites cibles (i.e. 5'N[indice inférieur 5] GUC /N[indice inférieur 6]'3) ainsi que la présence de ces derniers au niveau des 200 premiers nucléotides de l'ARNm de la désoxygénase de Solanum chacoense afin d'éviter la production de protéines tronquées présentant une activité. Une fois les sites sélectionnés, nous avons développé une cassette cis-trans-cis permettant la libération efficace de ribozymes trans exempts de séquences supplémentaires en 5 ' et en 3 ' pouvant interférer avec l'activité du ribozyme."--Résumé abrégé par UMI