Clonage, expression, analyse structurale et antigénicité de la ninéine humaine, une protéine du centrosome

Abstract

Le clone 43MB (clonage par Martine Chabot et séquençage complété par Choquette et al., 2000) a été isolé à partir d'une banque d'ADNc leucocytaire humaine lambda TriplEx (Clontech). Sa séquence de 2063 pb était nouvelle chez l'humain et homologue à l'extrémité 3' de l'ADNc de la ninéine murine (Crocker, 1995). L'extrémité 3' du clone 43MB se termine par une séquence non-homologue à la ninéine murine et ne comporte pas de poly A. La ninéine est une grosse protéine superhélicoïdale située dans le centrosome. L'extrémité 3' de l'ADNc de la ninéine humaine a donc été recherchée par extension d'amorce sur des banques Marathon (Clontech) leucocytaires et placentaires. Après la découverte de ces ADNc, plusieurs ADNc complets de la ninéine humaine ont été découverts par d'autres chercheurs. En comparant leurs séquences avec la banque du génome humain (programme BLAST, Altschul et al., 1990), la structure du gène, situé sur le chromosome 14, a pu être reconstituée. Enfin, chez l'humain, l'extrémité amino-terminale de la ninéine est reconnue par des autoanticorps dans certaines maladies autoimmunes (clone SM3, Mack et al, 1998)."--Résumé abrégé par UMI.