Protocole de purification du récepteur AT[indice inférieur]4 exprimé dans le coeur de veau

Abstract

Le système rénine-angiotensine-aldostérone joue un rôle important dans la régulation de la pression artérielle ainsi que dans le maintien de la résistance périphérique vasculaire. Plusieurs observations suggèrent que l'angiotensine IV (Ang IV), un hexapeptide provenant du clivage enzymatique de l'angiotensine II, aurait une activité biologique. Des études de liaison démontrent que l'Ang IV se lie avec une forte affinité aux membranes de coeur de veau. Étant donné que la structure moléculaire du récepteur à l'Ang IV (récepteur AT[indice inférieur 4]) demeure inconnue, notre objectif consiste à le purifier afin de le séquencer. Pour détecter le récepteur AT[indice inférieur 4] à travers les différentes étapes de purification, il fut marqué de façon irréversible avec un ligand photosensible (Mr de 153 kDa). L'hydrolyse des membranes photomarquées avec la trypsine (25 [micro]g/ml) a libéré un fragment soluble du récepteur ayant une taille de 143 kDa. Cette étape a fourni un enrichissement du récepteur tel que démontré par chromatographie SDS-PAGE. Le fragment soluble fut ensuite filtré à travers une colonne Sépharose CL-6B qui permet de séparer les protéines selon leur taille."--Résumé abrégé par UMI.