Interaction de hnRNP A1/UP1 avec les séquences télomériques humaines et l'ARN de la télomérase

Abstract

Les protéines hnRNP A1/UP1 sont en mesure d'interagir directement avec des séquences télomériques humaines. L'expression de l'une ou l'autre de ces protéines dans les cellules de mammifères provoque un allongement des télomères chez celles-ci. De plus, la forme recombinante de la protéine UP1 est en mesure de recruter l'activité télomérasique à partir d'un lysat cellulaire in vitro. Afin d'établir les bases moléculaires qui régissent les interactions entre les séquences télomériques, ces protéines et l'ARN de la télomérase, nous avons étudié les interactions de chacun des domaines de liaison à l'ARN pour leur habileté à interagir avec les acides nucléiques. Nous avons pu établir que les deux domaines sont impliqués dans la liaison à des acides nucléiques distincts. Le premier RRM est nécessaire pour interagir de façon spécifique avec les répétitions d'ADN télomériques alors que le second RRM est nécessaire pour permettre une liaison spécifique à l'ARN de la télomérase. Nos études de liaison en gel de retardement ont de plus permis de montrer que les protéines A1 et UP1 sont en mesure d'interagir avec l'ARN de la télomérase. Nous avons également pu établir, par des essais de protection, que la présence de la protéine UP1 entière est essentielle pour permettre une protection efficace contre l'action de la DNase I. Nos études de chromatographie suggèrent que les protéines A1 et UP1 peuvent interagir simultanément avec les répétitions d'ADN télomériques et l'ARN de la télomérase in vitro. Nous avons également montré que cette interaction pouvait résister à une incubation dans un extrait nucléaire complexe. Ces résultats suggèrent que l'interaction ARN de la télomérase-A1-ADN télomérique est possible dans un contexte cellulaire normal. Nos résultats supportent un modèle dans lequel la protéine A1 recruterait la télomérase aux extrémités des chromosomes de vertébrés.