Mutants de l'antigène grand T du virus du polyome affectés dans la réplication virale

Abstract

Afin de mieux comprendre le mécanisme d'action de la réplication du virus du polyome, nous avons déterminé l'impact que possède différents mutants de grand T qui sont affectés dans cette fonction. Les mutants sont classés en deux catégories, avec ou sans activité réplicative. La production de doubles mutants ainsi que la complémentation entre les mutants a permis de démontrer que l'antigène grand T est influencé par différents facteurs en cis et trans, qui permettent a grand T de répliquer efficacement un vecteur ADN portant l'origine de réplication virale dans différents types cellulaires. Le domaine aminoterminal (NT) de grand T joue un rôle prépondérant dans l'activité de l'antigène. En plus de permettre l'avancement du cycle cellulaire par sa liaison au produit du gène du rétinoblastome, il stimule en trans l'activité du domaine carboxy-terminal (CT) à un niveau comparable à celui de grand T. De plus, dans le contexte de grand T, le domaine NT stimule la portion CT par un effet cis. La fonction attribuable à NT peut être liée à l'observation récente que les séquences N-terminales des antigènes T présentent une homologie avec les domaines J des chaperones moléculaires DnaJ. L'absence ou un changement dans la structure du domaine J dans grand T du virus du polyome diminue son efficacité réplicative. Ces mutants peuvent être complémentés par NT. Toutefois, la présence du domaine J n'est pas seule responsable de l'activité de NT. L'absence d'un site de phosphorylation (a.a. 270-280) de grand T impliqué dans la réplication attribue un caractère dominant négatif au mutant LTdl97. Par la formation d'hexamères hétérogènes inactifs avec grand T, via la structure en doigt de zinc, LTdl97 prévient un événement de phosphorylation et/ou déphosphorylation conduisant à l'inactivation de l'hexamère."--Résumé abrégé par UMI.