Essais de purification et séquençage de la glycoprotéine GP39

Abstract

La glycoprotéine GP39 est localisée dans les granules de sécrétion des cellules indifférenciées des glandes gastriques, des cryptes intestinales et coliques, et des cellules épithéliales des glandes associées au tractus digestif: glandes salivaires, vésicule biliaire et pancréas. De plus, on la trouve dans plusieurs glandes exocrines, dont les sécrétions viennent en contact avec le milieu extérieur: glandes lacrymales, glandes sudoripares. À cause de cette distribution, nous avons émis l'hypothèse que la GP39 pourrait jouer un rôle dans la protection contre les bactéries. L'objectif de ce travail était de purifier cette glycoprotéine afin d'en faire le séquencage. Plusieurs approches de purification ont été effectuées: immunoprécipitation, chromatographie d'affinité, divers gradients, électro-élution, et criblage d'une librairie d'expression.La séquence des douze premiers acides aminés de la parti [i.e. partie] NH[indice inférieur 2] terminale a été déterminée. Cette séquence, QELEELNVPGEL, est homologue a 100% avec les premiers acides aminés de la bêta-caséine bovine. Par contre nous savons que la GP39 n'est pas une caséine puisqu'elle a un poids moléculaire de 350 kDa tandis que la bêta-caséine a un poids de 25 kDa. Cinq clone positifs ont ensuite été obtenus suite au criblage d'une librairie d'expression d'ADNc d'intestin grêle humain 5'STRETCH PLUS. Les ADNc intestinaux de trois de ces cinq clones ont été amplifiés par PCR. Ces trois ADNc seront éventuellement clonés dans le vecteur pBluescript[reg] II KS pour en faire le séquencage. Les séquences obtenues seront comparées à l'aide d'une banque de gènes pour déterminer s'ils correspondent à des gènes nouveaux ou à des gènes déjà connus.