Rôle de la pyruvate kinase dans le métabolisme du glucose chez Vibrio Costicola

Abstract

La bactérie Vibrio costicola est un bâtonnet gram-négatif, qui manifeste un besoin essentiel en sel pour sa croissance et sa survie. Elle croît dans des solutions de NaC1 entre 2 et 23%, avec un optimum entre 6 et 12%, ce qui la classifie parmi les bactéries modérément halophiles. Elle est capable d'utiliser le glucose colmate source de carbone et d'énergie et apparaît comme une bactérie aérobie stricte. Cette étude a été entreprise pour déterminer la voie empruntée par la bactérie dans le catabolisme du glucose. Les voies possibles sont: la voie d'Embden-Meyerhof, la voie des pentoses, la voie de la phosphocétolase et la voie d'Entner-Doudoroff. Tous les enzymes caractéristiques de cette dernière ont été mis en évidence dans l'extrait bactérien alors que les enzymes-clés des autres voies n'étaient pas détectables. Cette étude a aussi servi à déterminer la régulation de la pyruvate kinase dans le métabolisme du glucose. Une purification préliminaire a été effectuée et les propriétés cinétiques de la pyruvate kinase ont été étudiées. La vitesse de réaction en fonction de la concentration en PEP donne une courbe sigmoïde avec un plateau intermédiaire. La présence du plateau intermédiaire dépend de la concentration de l'enzyme ce qui indique que ce phénomène est lié à un état d'agrégation de la pyruvate kinase. En présence d'une concentration de sel 0.7M, comparable à la concentration intra-cellulaire, les courbes de saturation sont déplacées vers les concentrations de substrat plus élevées; le sel donc a pour effet de diminuer l'affinité de l'enzyme pour le PEP.