Purification des grains zymogènes de rat. Étude de leur stabilité in vitro. Étude des effets de diverses substances sur la stabilité.

Abstract

Les grains zymogènes du pancréas de rat sont extraits par homogénisation et centrifugation différentielle et sont resuspendus dans du sucrose 0.65M à pH 6.0 et 0°C. Nous avons étudié la stabilité de ces grains zymogènes dans différentes conditions. Les grains zymogènes sont plus stables à 0°C qu'à 37°C et en sucrose 0.65M qu'en sucrose 0.15M. De plus, la dilution affecte leur stabilité. Le pH optimum de stabilité est pH. 6.0. Au-dessus de ce pH la stabilité décroît très rapidement. Les ions métalliques tels que sodium et potassium n'affectent presque pas la stabilité jusqu'à une concentration de 10-1M par contre les cations divalents tels que magnésium, baryum sont un peu plus actifs et le calcium surtout provoque une sortie des protéines des grains zymogènes. L'effet du calcium est dépendant de la température et à 40°C l'effet est très marqué. Les protéines ajoutées aux grains zymogènes telles que l'a-amylase, lipase, ovalbumine, ne modifient pas ou presque pas leur stabilité par contre la phospholipase entraîne une lyse très rapide des grains zymogènes ainsi que la sérum albumine bovine. L'a-chymotrypsine ajoutée aux grains zymogènes les protègent efficacement contre la lyse par le calcium, la température, le pH, le phospholipase, cependant l'a-chymotrypsine doit être enzymatiquement active pour avoir un rôle protecteur. Certaines substances ajoutées aux grains zymogènes, telles que l'ATP ne semble pas jouer un rôle très important sur la stabilité, par contre l'EDTA et la lysolécithine entrainent une lyse immédiate des granules et dans ce cas, l'a-chymotrypsine est incapable de s'y opposer. Enfin par chromatographie en phase gazeuse, nous avons montré que l'a-chymotrypsine pouvait protéger les grains zymogènes des effets de la phospholipase mais qu'elle ne peut empêcher l'action de la phospholipase sur un substrat synthétique ce qui semble indiquer que l'effet protecteur de l'a-chymotrypsine s'exerce directement sur le grain zymogène lui-même.