Mécanisme de sécrétion du pancréas : phénomène d'agrégation et de résolubilisation in vitro des zymogènes pancréatiques de porc

Abstract

La ségrégation des protéines de la voie régulée a lieu au niveau du "trans-Golgi network" (TGN) via un mécanisme d'agrégation sélective en milieu acide. À l'aide d'un mécanisme d'agrégation in vitro, nous avons reconstitué le mécanisme d'agrégation des zymogènes pancréatiques de porc et, caractérisés les interactions qui président à cette agrégation et la capacité de resolubilisation de ces agrégats suite à l'exocytose. Les résultats obtenus démontrent que l'acidification des zymogènes pancréatiques à différents pH en présence de KCl, CaCl₂ et de MgCl₂, conditions qui sont près de ce qu'on retrouve in vivo, mènent à une agrégation peu efficace alors que l'agrégation sans sel est très efficace. Dans le but de caractériser les interactions nécessaires à l'agrégation et à la resolubilisation, nous avons utilisé des agents, reconnus pour agir sur les liens électrostatiques et les interactions hydrophobes, tel le NaCl et le propylène glycol. Grâce aux agrégats formés en présence de fortes concentrations de sel, menant ainsi à des agrégats pauvres en contenu protéique et entièrement hydrophobes, nous démontrons que les interactions hydrophobes permettent une agrégation peu efficace et très peu réversible. Quant aux liens électrostatiques, la similitude entre les agrégats formés en présence de propylène glycol et ceux obtenus avec l'effet du pH seul démontrent que ces liens provoquent une agrégation importante qui est totalement réversible. Nous démontrons également l'importance du milieu de resolubilisation, puisque la resolubilisation en milieu alcalin est beaucoup plus efficace avec le bicarbonate qu'avec d'autres tampons au même pH. Ces résultats suggèrent que les interactions entre les protéines soient à la base de l'agrégation des protéines destinées à la voie régulée. Les conditions qui existent pendant l'agrégation au niveau de la cellule favoriseraient des interactions spécifiques à l'agrégation des zymogènes; donnant lieu à un mécanisme basé sur la spécificité et non la quantité de protéines agrégées.