Mise au point d'un procédé de conservation des plaquettes sanguines et modulation de l'agrégation

Abstract

Depuis plusieurs années de nombreux chercheurs ont travaillé à la mise au point de nouvelles stratégies de conservation des plaquettes sanguines. Ils visaient à développer un procédé qui permettrait une préservation à long terme. Nous avons abordé ce problème en émettant les hypothèse suivantes: (1) les plaquettes sanguines de mouton peuvent être conservées à 4°C dans un milieu synthétique minimum autre que le plasma sanguin et garder leur intégrité fonctionnelle durant une période de temps prolongée; (2) la durée de conservation des plaquettes sanguines de mouton peut être améliorée par l'ajout d'un inhibiteur de l'activation plaquettaire, l'ATPDase de l'aorte de boeuf au plasma; (3) les plaquettes sanguines de mouton peuvent être cryopréservées à -196°C dans un milieu synthétique et garder leur intégrité fonctionnelle suite à la décongélation; (4) l'ATPDase de l'aorte de boeuf qui médie la thromborégulation intervient dans l'agrégation plaquettaire en modulant les niveaux de nucléotides sanguins. L'analyse des paramètres in vitro nous permettant de vérifier l'état fonctionnel des plaquettes durant une période de 4 jours, nous a montré que la conservation des plaquettes sanguines dans le milieu synthétique PLX à 4°C inhibe la production d'acide lactique par les plaquettes à cause de l'absence de substrats métaboliques pour la glycolyse et de la réduction du métabolisme à 4°C. L'utilisation du milieu synthétique ne permet toutefois pas de maintenir les propriétés d'agrégation des plaquettes. Cependant, ce milieu permet de garder les plaquettes intactes durant les 4 jours de conservation. De la même façon, les résultats concernant la cryopréservation des plaquettes à une température de -196°C dans le milieu PLX ont montré que les plaquettes sont en grande partie intactes suite à la décongélation mais qu'elles perdent en totalité leur capacité de s'agréger. Quant à l'utilisation d'un inhibiteur de l'activation plaquettaire, l'ATPDase de l'aorte de boeuf, afin de prolonger la viabilité plaquettaire in vitro, les résultats obtenus nous suggèrent que l'ajout de l'ATPDase de l'aorte de boeuf n'améliore pas la durée de conservation des plaquettes sanguines. Finalement, nos études d'agrégation in vitro nous ont confirmé que l'ADP est le seul nucléotide impliqué dans l'agrégation et que l'ATPDase de l'aorte de boeuf peut contrôler l'agrégation plaquettaire en modulant les niveaux de nucléotides sanguins.