Impact du glyoxal sur la signalisation du récepteur de l'angiotensine II de type 1

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Publication date
2020Author(s)
Touchette, Sophie
Subject
AT1RAbstract
Les produits de glycation avancée (PGA) sont des composés formés suite à la réaction non-enzymatique de métabolites de sucres réducteurs, tels que le glucose et le fructose avec les résidus
lysine et arginine des protéines. Cette réaction est exacerbée chez les sujets diabétiques présentant
une hyperglycémie chronique. Le glyoxal (GO) est un métabolite important de la glycolyse et un
niveau élevé et soutenu de celui-ci pourrait être associé au développement de l'hypertension
artérielle. Le récepteur de l’angiotensine II de type 1 (AT1R), un élément important dans la
régulation de la tension artérielle, possède de nombreux résidus lysine et arginine susceptibles
d'être modifiés par le GO. Or la modification de ces résidus pourrait affecter la liaison du
récepteur avec l'agoniste Angiotensine II (AngII), son activation, ou encore son couplage avec
les protéines-G et les β-arrestines. Afin de vérifier cette hypothèse, nous avons, dans un premier
temps, réalisé des expériences de signalisation cellulaire à partir d’un essai intégré de la réponse
cellulaire, afin d’évaluer l’impact d’une exposition au GO, sur la réponse cellulaire médiée par
l’AngII, de cellules HEK293 surexprimant de façon stable AT1R (HEK293-AT1R). Les résultats
obtenus indiquent une diminution de l’activation des voies G12/13/Rho/ROCK, Gq/11 et ERK1/2-
dépendantes. De façon plus ciblée, nous avons évalué l’activation de la voie MAP kinase ERK1/2
à l’aide de l’essai AlphaScreen, ainsi que la production des inositols phosphates (voie Gq) grâce
à la trousse IP-One. Nous avons également évalué avec des biosenseurs BRET, le recrutement
de la β-arrestine 2 ainsi que l’activation de la voie Gq. Nous avons ensuite mesuré les propriétés
de liaison de l’AngII à AT1R par des essais de liaison en présence de GO. Dans le but d’observer
la modification dépendante du GO sur le récepteur, nous avons réalisé des expériences
d'immunoprécipitation-immunobuvardage sur les cellules HEK293-AT1R traitées au GO. Ces
cellules ont révélé la formation de dérivés carboxyméthyllysine (CML) au niveau de protéines
cellulaires. Finalement, nous avons tenté d’identifier les résidus lysine et arginine glyqués sur
AT1R à partir d’expériences en spectrométrie de masse. De façon générale, nos résultats
suggèrent que l’exposition au GO des cellules HEK293-AT1R entraine une diminution de
l’activation des voies de signalisation par l’essai intégré de la réponse cellulaire, une diminution
de la puissance pour l’ensemble des voies de signalisation étudiées, une diminution de l’efficacité
pour l’activation des voies Gq et ERK1/2 ainsi qu’une diminution de l’affinité de l’AngII pour
AT1R.
Collection
- Moissonnage BAC [4508]
- Médecine et sciences de la santé – Mémoires [1788]