Purification et caractérisation de la membrane apicale de la cellule acineuse et sécrétion de la GP-2 dans le suc pancréatique basal de rat

Abstract

La membrane plasmique de la cellule acineuse pancréatique est divisée en deux pôles distincts: une région apicale et une région basolatérale. Chaque région possède une fonction particulière qui fait appel à des protéines et à des lipides capables de relever des défis spécifiques. Des molécules comme la gamma­glutamyltranspeptidase, les sialoglycoprotéines et les sialoglycolipides sont concentrées spécifiquement à la membrane apicale. D'autres, comme le récepteur de la cholécystokinine et la sodium/potassium-adénosine triphosphatase, sont exclusivement localisées à la membrane basoltérale. Nous nous sommes proposé de purifier la membrane apicale de la cellule acineuse pancréatique de rat, parce que cette fraction de la membrane plasmique est généralement impliquée dans l'exocytose. Les résultats obtenus avec des rats à jeun, indiquent que nous avons purifié une membrane d'origine exclusivement apicale. Elle est fortement enrichie en gamma-glutamyltranspeptidase, et ne révèle aucune trace de la sodium/potassium-adénosine triphosphatase qui avait été immunodétectée sur la membrane basolatérale. Nous avons, de plus, observé l'absence de la GP-2 sur la membrane apicale et la polarisation de la protéine dans la cellule acineuse. Elle est ancrée à la membrane du granule de zymogène via l'inositol phosphate glycan et elle est sensible à la phospholipase C. L'évidence de la solubilisation de la protéine dans le suc pancréatique basal par une phospholipase C endogène spécifique à l'inositol phosphate glycan a été présentée. Un site antigénique commun à toutes les protéines ancrées via l'inositol phosphate glycan a été exposé par la phospholipase C, et ce site a été reconnu par un anticorps spécifique à cet épitope. Finalement, la GP-2 ancrée à la membrane basolatérale est insensible à une phospholipase C exogène. Ces résultats indiquent l'existence de deux types de GP-2, un type membranaire ancré à la membrane du granule de zymogène via l'inositol phosphate glycan, et un autre type intrinsèque à la membrane basolatérale mais insensible à la phospholipase C . La purification de la membrane apicale et de la membrane basolatérale de la cellule acineuse et la caractérisation de la GP-2 du pancréas de rat, permettront l'élucidation moléculaire de !'exocytose et du rôle de la glycoprotéine dans la sécrétion des zymogènes.