Rôle de la chymase dans la réponse pressive et la conversion de la Big endothéline-1 chez la souris

Abstract

La voie classique de production de l'ET-1 à partir de la Big ET-1 requiert l'activité des enzymes de conversion de l'endothéline (ECE). Différentes études in vitro ont aussi montré que la Big ET-1 pouvait être transformée par la chymase, une protéase à sérine, en un intermédiaire de 31 acides aminés, l'ET-1 (1-31). Il est donc suggéré que la production in vivo d'ET-1 (1-31) via l'activité de la chymase représente une voie alternative indépendante de l'ECE dans la conversion de la Big ET-1. Le but de ce mémoire était donc d'étudier le rôle de la chymase dans la conversion de la Big ET-1 in vivo. Pour ce faire une approche pharmacologique a été privilégiée chez la souris C57/BL6J anesthésiée et instrumentée. Ainsi, les réponses pressives des Big ET-1, d'ET-1 (1-31) et d'ET-1 ont été déterminées. Malgré une réponse pressive maximale similaire pour les trois peptides, l'ET-1 était six fois plus puissant que l'ET-1 (1-31) et la Big ET-1. De plus, les réponses pressives des trois endothélines ont été respectivement diminuées ou amplifiées par les antagonistes sélectifs des récepteurs ETa (BQ-123) ou ETb (BQ-788). Les réponses pressives à la Big ET-1 ont été diminuées par le thiorphan, un inhibiteur de la NEP, et le CGS 35066, un inhibiteur de l'ECE. D'un autre côté, les réponses à l'ET-1(1-31) ont été abolies seulement par le thiorphan. Ces résultats suggèrent donc que l'ECE et la NEP sont responsables des effets presseurs de la Big ET-1, alors que seule la NEP est impliquée dans ceux de l'ET-1 (1-31). De plus, le Suc-Val-Pro-Phe(P)-(0Ph)2, un inhibiteur de la chymase, a réduit de plus de 50% la réponse à la Big ET-1 sans affecter celle de l'ET-1 (1-31). Ces résultats suggèrent que la chymase est une enzyme importante dans la réponse pressive à la Big ET-1. Des immunoessais spécifiques couplés au HPLC ont permis de montrer une augmentation significative des taux plasmatiques d'ET-1 (1-31) et d'ET-1 suivant l'administration intraveineuse de Big ET-1. Ces augmentations ont été abolies chez les animaux prétraitées au Suc-Val-Pro-Phe(P)-(0Ph)2 confirmant le rôle de la chymase dans la conversion de la Big ET-1. La spécificité du Suc-Val-Pro-Phe(P)-(0Ph)2 et l'activité chymase ont également été évaluées dans divers organes (cœur, poumons et aortes) à l'aide d'essais fluorogéniques. Enfin, l'expression relative de la NEP, l'ECE-la et les mMCP-4 et 5 ont été établies dans ces mêmes organes avec l'aorte exprimant les plus hauts niveaux d'ARNm des deux isoformes de la chymase par rapport à l'ECE-la. En conclusion, la chymase serait impliquée dans les propriétés cardiovasculaires de la Big ET-1 administrée systémiquement, dans sa conversion en ET-1 (1-31) et dans les variations plasmatiques de l'ET-1.