4'-mercaptophenylalanine, introduction dans l'angiotensine II et application dans la synthèse d'un antigène hautement homogène de l'angiotensine II

Abstract

La synthèse de la 4'-mercaptophénylalanine a été réussie à partir de la phénylalanine, par la chlorosulfonation et la réduction acide chlorhydrique/étain métallique. Les dérivés développés pour l'utilisation de la 4'-mercaptophénylalanine en synthèse peptidique sur phase solide, comprennent les acides Na-t-butoxycarbonylaminés suivants: la S-t-butoxycarbonyl-4'-mercaptophénylalanine, le disulfure symétrique de 4'-phénylalanyl, les disulfures mixtes de 4'-phénylalanyl n-butyle ou p-tolyle, les composés S-benzylé, S-m-bromobenzylé et S-p-nitrobenzylé de la 4'-mercaptophénylalanine, ainsi que la S-acétamidométhyl-4'-mercaptophénylalanine. Les dérivés compatibles avec les exigences de la synthèse MERRIFIELD sont les produits S-benzylé, S-m-bromobenzylé et S-acétamidométhylé. Pour éviter l'étape de débenzylation sodium métallique/ammoniaque liquide, on choisit ce dernier pour les synthèses d'angiotensine. La 4'-mercaptophénylalanine se déprotège de son groupement S-acétamidométhyl, par l'acétate de mercure. Les angiotensines II, contenant la 4'-mercaptophénylalanine en position 4 ou 8, sont testées in vitro sur l'aorte de lapin. On présente leurs caractéristiques pharmacologiques. La 4'-mercaptophénylalanine a rendu possible une méthode de conjugaison spécifique de l'haptène [Sar1, Val5, (4'-SH) Phe8]AT, par la position para du noyau aromatique. Le peptide peut se lier à une protéine modifiée avec l'anhydride maléique, pour obtenir un antigène ou à une résine modifiée, pour permettre la chromatographie d'affinité. La détermination de la quantité d'haptènes sur l'antigène donne une substitution de 25 angiotensines par mole d'albumine. Le développement d'anticorps de lapin avec l'antigène synthétique montre que l'immunogénicité de l'angiotensine se situe à la position 1 de la partie N-terminale du peptide. Le déplacement du marqueur [Sar1,Val5,(3',4',5'- 3H3)Phe8]AT des sites de liaison des anticorps sert à l'étude de la réactivité croisée des anticorps, qui présentent une insensibilité â toute angiotensine ne possédant pas la sarcosine en position 1.