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Other titre : Nature de l'ADN associé avec les particules incomplètes de l'adénovirus type 2

dc.contributor.advisor[non identifié]
dc.contributor.authorKhittoo, Govindranathsing
dc.date.accessioned2019-03-22T15:34:15Z
dc.date.available2019-03-22T15:34:15Z
dc.date.created1979
dc.date.issued1979
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11143/15150
dc.description.abstractAbstract: The lytic infection of human cells by adenovirus type 2 at 39°C, results in the production of both infections (complete) and defective (incomplete) particles. However, H2ts4 produces only incomplete particles at this temperature. Incomplete particles (IP) were isolated from HEp-2 cells infected with Ad2 and H2ts4. A reconstruction experiment revealed that IP were not significantly contaminated with complete particles after two cycles of centrifugation in cesium chloride (CsC1). Electrophoresis in 1% agarose gels showed that the DNA present in IP was heterogeneous ranging from DNA that co-migrated with genome size DNA (IPSD1) to 300 base pairs or less (IPSD2). Sucrose velocity sedimentation indicated that the majority of the IP DNA sedimented at 6 - 18 S. Cleavage of ts4-IP DNA with restriction enzymes gave rise to atypical restriction patterns, while WT-IP DNA gave rise to a typical pattern. Similar results were obtained when IP were isolated from ficoll or CsC1 gradients. Using Southern's blotting technique (1975) coupled with hybridization, we demonstrated that there were both viral and cellular DNA in IP. The results of hybridization experiments with both viral and cellular DNA to identical restriction fragments of IP DNA showed that the viral and cellular sequences were not covalently linked. This finding was confirmed by the sandwich hybridization technique. IP from Ad3 and Ad5 were also shown to contain viral and host cell DNA sequences. IPSD1 seemed to contain fragments from the entire viral genome. Whereas IPSD2 seemed to comprise mostly of a left end segment of the viral genome. Incubation of DNA from various sources (l , E. coli, HEp-2, Ad2) with IP and Ad2 virions showed that a nonspecific endonuclease activity was associated with the viral particles. Further, the IP manifested a higher specific activity than complete particles. It is possible that this nuclease is responsible for the origin of the fragmented DNA observed in IP. A comparison of the spectrum of phosphoproteins, DNA-binding proteins and precursor proteins in IP and complete virions was consistent with the results of the DNA analysis and together suggested that the bulk of IP are not precursors of complete virions but rather "dead end" particles.||Résumé: Lors d'une infection lytique à 39°C, l'adénovirus type 2 (WT) produit deux sortes de particules: les particules infectieuses et des particules défectueuses dites "particules incomplètes". Le mutant ts4 (un mutant thermosensible de l'adénovirus type 2) produit seulement des particules incomplètes à cette température. Deux centrifugations successives dans un gradient de chlorure de césium (CsC1) suffisent à purifier les deux sortes de particules. L'analyse de l'ADN des particules incomplètes sur des gels d'agarose ou par sédimentation en gradient de saccharose démontrent que ces particules renferment une population hétérogène de molécules d'ADN: des molécules de la même grandeur que le génome viral et d'autres comprenant moins de 1% du même génome. La plupart de ces molécules sédimentent entre 6 et 18S. Le clivage de l'ADN des particules incomplètes par des enzymes de restriction produit des fragments atypiques dans le cas de ts4. On obtient les mêmes résultats avec les particules virales isolées à partir des gradients de ficoll. La technique de "blotting" suivie de l'hybridation démontre la présence de l'ADN d'origine cellulaire dans les particules incomplètes. Les molécules de l'ADN cellulaire et viral ne semblent pas être liées d'une façon covalente. Les mêmes techniques démontrent que les particules incomplètes de l'adénovirus du sérotype 3 et 5 contiennent aussi des séquences d'ADN cellulaire. Les petites molécules d'ADN semblent être enrichies pour les séquences provenant de l'extrémité gauche du génome viral. En incubant l'ADN provenant de l, E. coli, HEp-2, et Ad2 avec des particules virales on peut démontrer la présence d'une activité nucléasique associée avec ces particules. Les particules incomplètes semblent posséder une plus grande activité nucléasique. Cette activité pourrait être l'origine des petits fragments d'ADN présents dans les particules incomplètes. La comparaison des protéines (phosphorylées, qui ont une affinité pour l'ADN, ou précurseurs) des particules infectieuses avec celles des particules incomplètes indiquent que la plupart de ces dernières ne se changent pas en particules infectieuses. L'analyse de l'ADN associé avec les particules incomplètes semble soutenir cette hypothèse.
dc.language.isoeng
dc.publisherUniversité de Sherbrooke
dc.rights© Govindranathsing Khittoo
dc.titleThe nature of the DNA associated with incomplete particles of adenovirus type 2
dc.title.alternativeNature de l'ADN associé avec les particules incomplètes de l'adénovirus type 2
dc.typeThèse
tme.degree.disciplineMicrobiologie
tme.degree.grantorFaculté de médecine et des sciences de la santé
tme.degree.levelDoctorat
tme.degree.namePh.D.


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