Purification et caractérisation d'un inhibiteur de trypsine présent dans Solanum tuberosum

Abstract

Nous décrivons une méthode d'extraction des protéines de Solanum tuberosum. Ces protéines sont virtuellement débarrassées de tous les conposés phénoliques initialement présents. Elles présentent le même patron électrophorétique quelles que soient la provenance des pommes de terre (U.S.A. ou Canada).et l'année de la récolte. De plus, elles contiennent des inhibiteurs de trypsine, de chymotrypsine et d'élastase. En mettant à profit l'affinité plus ou moins grande d'un enzyme spécifique ou homologue pour un inhibiteur, il y a possibilité, par chromatographie sur une colonne de Sepharose-trypsine, de départager les protéines en deux groupes: les protéines avec pouvoir inhibiteur et les protéines sans pouvoir inhibiteur. Par un changement judicieux d'éluant, un inhibiteur de trypsine peut être isolé en une seule étape. Cet inhibiteur (ITT) n'est pas spécifique pour la trypsine; il inhibe également la chymotrypsine et l'élastase mais faiblement. La constante de dissociation de l'inhibiteur de la trypsine (Ki) est évalué à 8 X 10-7M. L'inhibiteur de trypsine dont le coefficient E 1% / 2 80 vaut 10.28 et dont le pI est 6.9 ne contient aucun sucre et aucun groupement –SH libre. L'analyse de la composition en acides aminés permet d'établir que la protéine contient 207 acides aminés et le P.M. est évalué à 21-22,000. L'homogénéité de la protéine est confirmée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide à deux pH, par ultracentrifugation et par la détection d'un seul acide aminé en position N-terminale.