Biosynthèse du DNA nucléolaire dans les cellules de mammifère

Abstract

Une méthode de chasse naturelle a été utilisée pour étudier la biosynthèse du DNA nucléolaire et extranucléolaire. Une unique injection de thymidine tritiée est faite à un rat portant les cellules tumorales ascitiques, 15 minutes après l'injection de thymidine tritiée, on observe une chasse naturelle des précurseurs utilisés. Les cinétiques de marquage des fractions ascitiques, cytoplasmiques et nucléolaires ont été étudiées. La radioactivité dans les fractions TCA soluble diminue rapidement en fonction du temps. L'incorporation de thymidine dans le DNA total est négligeable 30 minutes après l'injection de thymidine. L'activité spécifique du DNA nucléolaire et extranucléolaire des cellules ascitiques de Zajdela a été déterminée sur des fractions purifiées, et comparée pour des marquages allant de 5 à 180 minutes. La cytochimie ultrastructurale a révélé que le DNA isolé de la sous-fraction nucléolaire était contenu dans la chromatine périnucléolaire et ses ramifications intranucléolaires. L'activité spécifique de ce DNA est légèrement inférieure è celle du DNA extranucléolaire. Le DNA nucléolaire et extranucléolaire a été extrait selon différentes méthodes et sa structure secondaire déterminée par: chromatographie sur hydroxyapatite, traitement à la nucléase de Neurospora Crassa, hyperchromicité et microscopie électronique. La séparation du DNA nucléolaire et extranucléolaire sur hydroxyapatite montre deux pics caractéristiques, l'un simple chaîne et l'autre double chaîne. Les DNAs simple chaîne et double chaîne nucléolaires ont été analysés par ultracentrifugation préparative en gradient de densité de chlorure de césium. Le DNA simple chaîne a un contenu en guanine-cytosine plus élevé que celui du DNA double chaîne ou DNA nucléolaire total, des expériences d'hybridation ont révélé cependant que ce simple chaîne nucléolaire n'hybride pas de façon significative avec le rRNA. L'évolution des fractions simple chaîne nucléolaire et extranucléolaire a été suivie en fonction du temps, nous concluons en tenant compte des faits précédents qu'une portion du DNA simple chaîne correspond au DNA nouvellement synthétisé déstabilisé décrit par Habener et qu'une autre portion substantielle ne répondant plus à ces caractères est interprétée en fonction du modèle proposé par Crick, lequel suppose l'existence de DNAs simple chaîne dans les chromosomes de cellules d'Eucaryotes et ayant une fonction de régulation.