Immortalisation et caractérisation de la lignée cellulaire de rein fœtal humain PT-1.

Abstract

Pour ce travail, nous avons immortalisé des cellules de reins fœtaux humains à l'aide du gène grand T de SV40, dans le but d'établir un modèle d'étude de la prolifération et de la différenciation rénales. Une lignée cellulaire appelée PT-1 et provenant probablement du tubule proximal a été obtenue. Afin de caractériser davantage cette lignée, nous avons déterminé par dosages enzymatiques les niveaux d'activité de la phosphatase alcaline et de la y-glutamyltranspeptidase qui sont des marqueurs de différenciation et nous avons également étudié l'aspect morphologique ainsi qu'ultrastructural de la lignée PT-1 en culture. Nos observations ont indiqué que la lignée PT-1 se différencie partiellement en culture pour former un système multi-couche composé de six couches cellulaires, dix-sept jours après la confluence. La couche supérieure est légèrement polarisée, et comporte des cellules avec un aspect plus épithéloïde. Quelques jonctions cellulaires de type zonula occludens sont retrouvées à ce niveau et une lame basale sous-jacente est présente. Les autres couches sont d'allure mésenchymateuse et non polarisé et sont séparées par des espaces intercellulaires. Ensuite, nous avons étudié par immunofluorescence indirecte l'expression des constituants de la matrice extracellulaire (les chaînes B1 et B2 de la laminine, la ténascine), de la lame basale (fibronectine, collagène de type IV), des filaments intermédiaires (cytokératine, vimentine), des jonctions serrées (uvomoruline) et de l'agent immortalisant (la protéine grand T de SV40). Les résultats obtenus suggèrent que la protéine grand T est nécessaire au maintien de la prolifération. La lignée est caractérisée par une expression hétérogène de la kératine, vimentine, fibronectine, ténascine, collagène de type IV et une expression homogène des chaînes B1 et B2 de la laminine. L'uvomoruline est exprimée seulement dix jours après la confluence. Nous avons examiné l'expression de marqueurs de prolifération (c-myc) et de différenciation (y- GT). Elle réagit de façon normale à un signal de prolifération induit par le sérum puisque c-myc est exprimé transitoirement, tandis que l'expression de la y-GT est constante, indiquant une régulation post-transcriptionnelle. Par la suite, nous avons analysé l'effet de différentes substances sur la différenciation fonctionnelle et morphologique de la lignée PT-1. Toutes les substances étudiées ont eu un effet soit positif ou négatif sur l'un des deux marqueurs de différenciation fonctionnelle: la PA et la y-GT. Par contre, seul le dexaméthasone, l'acide rétinoïque et la suramine ont stimulé la différenciation morphologique de la lignée PT-1. Également, nous avons observé qu'un milieu sans glucose affecte la prolifération et la différenciation cellulaire de la lignée PT-1. Donc, la lignée cellulaire PT-1 d'origine humaine est unique et démontre un potentiel énorme en tant que modèle d'étude moléculaire des mécanismes impliqués dans la prolifération et la différenciation rénales humaines.