Étude des interactions entre les cellules endothéliales et les monocytes sur les fonctions lymphocytaires

Abstract

L'endothelium vasculaire participe activement au contrôle de l'homéostasie et de la perméabilité des vaisseaux sanguins. Lors de réactions inflammatoires et immunitaires, on note l'existence de nombreuses interactions entre les leucocytes et la paroi vasculaire. Notre étude visait, plus particulièrement, l'interaction des cellules endothéliales (CE) avec les monocytes et les lymphocytes, en conditions normales et inflammatoires. Pour ce faire, trois facteurs, reconnus pour avoir de multiples fonctions immunitaires, ont été utilisés, soit; l'IFNy, le PAF et le LTB4. L'effet de l'IFNy, du PAF et du LTB4 sur les CE a été mis en évidence dans la suppression par les CE de la prolifération des lymphocytes. La façon de procéder consistait à cocultiver les CE avec des monocytes, suivi d'une incubation subséquente avec les lymphocytes autologues. Les résultats démontrent une suppression de la prolifération des lymphocytes qui est encore plus importante lorsque les CE sont en présence de TNF. Cette suppression de la prolifération des lymphocytes est la conséquence de plusieurs facteurs. Tout d'abord, on note une augmentation de production d'IL-6 et de PAF par les CE. Il s'ensuit une activité suppressive des monocytes qui diminuent à leur tour la prolifération des lymphocytes: principalement via la libération de PGs. Ce phénomène a d'ailleurs été démontré par l'utilisation de PAF et d'IL-6 exogènes qui, ajoutés à une population de monocytes et de lymphocytes, provoquent une suppression de la prolifération des lymphocytes. Par la suite, le dosage de d’IL-6, produite par les CE et/ou les monocytes, a été effectué. Le PAF seul a la capacité d'augmenter la production d'IL-6 par les CE et l'addition de TNF aux CE induit une production plus importante d'IL-6. Par opposition au PAF, le LTB4 et l'IFNy nécessitent la présence de TNF pour favoriser une élévation significative d'IL-6. L'utilisation de la CHX en préincubation, combinée avec le PAF ou le LTB4, induit une réponse synergique de production d'IL-6 sur les CE. Ceci suggère que lors de la préincubation des CE avec la CHX, l'ARN accumulé est moins rapidement dégradé. Ainsi, après lavages des CE, la quantité d'ARN pouvant être traduit en protéine est beaucoup plus élevée. Pour vérifier si la production d'IL-6 par les monocytes est importante dans notre système, on procède au dosage d'IL-6 des monocytes seuls. On remarque que les monocytes produisent de 1'IL-6. Néanmoins, la production de celle-ci est augmentée de façon synergique lorsque les monocytes sont cocultivés avec les CE, stimulées ou non. Différents traitements utilisés, tels que le gel-dégel ou encore la paraformaldéhyde démontrent que la viabilité des deux types cellulaires, CE et monocyte, est nécessaire à la production synergique d'IL-6. De plus, l'utilisation de chambres "transwell" indique que le contact cellulaire entre les CE et les monocytes n'est pas indispensable. Par buvardage Northern, on décèle que le PAF, de même que le TNF, augmentent le niveau d'expression d'ARNm d'IL-6 des CE. Cependant l'utilisation conjointe du PAF et du TNF ne démontre pas d'effet synergique, contrairement à ce qui était observé en dosage d'IL-6 dans le surnageant. Le GM-CSF est un facteur reconnu pour favoriser la production de PGE2 par les monocytes et augmenter l'adhérence des monocytes aux CE. Nous avons donc étudié sa production par les CE. On remarque que contrairement à la production d'IL-6, celle du GM-CSF par les CE, préincubées avec PAF ou LTB4, nécessite la présence de TNF pour observer une augmentation significative. De même, la préincubation des CE avec la CHX induit une élévation de production de GM-CSF par contre celle-ci n'est pas synergique en présence de PAF ou de LTB4. Par opposition à la formation d'IL-6, la coculture des CE avec les monocytes révèle l'absence d'effet synergique des monocytes sur la production de GM-CSF par les CE. Néanmoins, les traitements de gel-dégel ainsi que de la paraformaldéhyde démontrent une fois de plus que la viabilité cellulaire des monocytes et des CE est indispensable à la hausse de production de GM-CSF. De même l'utilisation de chambres "transwell" indique que le contact cellulaire entre les CE et les monocytes n'est nullement nécessaire pour observer une production de GM-CSF. En terme de niveau d'expression d'ARNm de GM-CSF par les CE, on remarque une augmentation de l'expression de l'ARNm de GM-CSF par le PAF ou le TNF seul. L'interaction entre l'endothélium et les leucocytes implique donc de nombreux facteurs incluant le PAF, l'IL-6 et le GMCSF. De plus, plusieurs mécanismes tels que le rôle suppresseur des monocytes, par la productions de PGs, régulent certaines fonctions lymphocytaires.