L'antigène grand T de SV40 et la protéine p53 dans la recombinaison : propriétés in vitro

Abstract

Les antigènes grand T (LT) de SV40 et de polyome (Py) sont impliqués dans des événements de recombinaison génétique dans le noyau des cellules infectées ou transformées. Dans beaucoup de cas, ces événements semblent reliés à la fonction de LT dans la réplication. Cependant, la découverte d'une activité topoisomérase (topo) associée au LT de SV40 et de Py nous suggérait qu'il pouvait en être autrement, puisque toutes les recombinases site-spécifiques décrites dans la littérature possèdent une activité topo. De plus, la démonstration récente que p53, une protéine cellulaire qui interagit avec le LT de SV40, pouvait renaturer des DNAs complémentaires et réaliser de l'échange de brins in vitro, nous permettait de penser que le complexe LTp53 pouvait en faire autant. Les travaux présentés portaient sur d'éventuelles activités recombinogènes du LT de SV40, ainsi que sur les propriétés d'échange de brins de p53, et se résument en quatre parties. Premièrement, nos résultats indiquent fortement que l'activité topo associée au LT est spécifique et n'est pas due à une contamination par une topo cellulaire. Deuxièmement, la topo-LT est incapable de résoudre une structure de Holliday mais, en présence d'ATP, le LT peut défaire cette structure, probablement par son activité hélicase/dénaturase. Troisièmement, nous avons montré que le LT, dans un système d'échange à trois brins (DNA simple brin (sb) circulaire/ DNA duplex (db) linéaire), pouvait effectuer un semblant d'échange, probablement relié encore une fois, à son activité hélicase/dénaturase et à sa capacité à se lier à l'DNA sb. Finalement, nous confirmons que p53 peut faire de l'échange de brins dans un tel système mais que cet échange n'est pas de type RecA. C'est-à-dire qu'il n'y a pas formation d'un complexe protéine-DNA sb pour envahir un DNA db. Il fait plutôt intervenir l'activité renaturase de p53, et nécessite une charge positive sur la protéine ainsi que sa capacité d'oligomérisation. Nous faisons un parallèle entre l'association LT-p53 et ICP8-UL9, deux protéines du virus Herpès Simplex 1, pour qui une activité d'échange de brins a été montrée, ICP8 étant une renaturase, UL9 une hélicase. Les différentes activités de LT et p53, mises ensemble grâce à l'association des deux protéines, pourraient leur donner un rôle direct dans les événements de recombinaison génétique impliquant le virus SV40.