Caractérisation physicochimique du virus de la lymphocystis

Abstract

Le virus de la Lymphocystis (LDV) a été produit "in vitro" à l'aide de cultures de cellules de poissons et marqué, durant son cycle de réplication, par des radioisotopes. La concentration des virions récoltés a été faite en gradients de saccharose discontinus et le titrage des sus­ pensions réalisé par une technique employant des Lab-teks. Le LDV fut ensuite purifié puis étudié à l'aide de gradients iso­ pycniques ou linéaires de CsCl et de saccharose. Un traitement à la DNase et à la RNase des suspensions virales a souvent été appliqué, avant l'uti­ lisation des gradients mentionnés. Les suspensions virales ainsi purifiées ont servi, à l'occasion, à une étude spectrophotométrique mais surtout à une étude morphologique en microscopie électronique. La production virale, apparemment faible, de l'ordre de 105 TCio50/ml, a tout de même été suffisante car nous avons développé des techniques de récolte de cellules infectées et de concentration en gradients discontinus de saccharose très efficaces, amenant 95% de récupération dans le cas de la récolte. Le titrage, par contre, s'est avéré assez imprécis à cause de la forme des Lab-teks. L'étude du LDV en gradients isopycniques de CsCl a révélé, mal gré de grandes pertes, l'existence de trois populations de nature virale. La première à faible densité, sensible à la DNase et à la RNase, l'autre, constante à 1,31 g/cm3 après une deuxième centrifugation en gradient de CsCl et la dernière, à haute densité, partiellement détruite par le DNase et la RNase, se retrouvant même dans les gradients chargés uniquement du pool des fractions formant les deux premières populations mentionnées. Quant aux résultats obtenus en gradients de saccharose linéaires, ils montrent, si l'échantillon étudié n'est pas très concentré, une population homogène ayant un spectre d'absorption en lumière ultraviolette caractéristique d'un virus. Une cocentrifugation de cet isolat avec le virus de la vaccine nous permet d'estimer le coefficient de sédimentation du LDV à 3 400 s. Les gradients isopycniques de saccharose, eux, permettent une bonne purification de quantités relativement grandes de virus si le temps de centrifugation est de 8 h tout au plus, et si le tampon utilisé a une faible force ionique et contient de 1 1 EDTA. La microscopie électronique, pour sa part, nous révèle que le LDV a fort probablement une forme icosaédrique et un diamètre moyen, pour 21 particules mesurées de côté à côté, de 265 ± 28 nm. On remarque aussi que la capside, apparemment formée d'unités protéiques annulaires de 9 à 10 nm, elles-mêmes composées de sous-unités de 3 ou 4 nm, montre en coloration négative, une structure triple comprenant deux couches claires de 5 à 6 nm séparées l'une de l'autre par une couche opaque de 2 à 3 nm. La majorité des photographies montrent des projections partant de la capside d'un virion souvent entremêlées à celles d'un autre virion.