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dc.contributor.advisor[non identifié]
dc.contributor.authorCloutier, Mario
dc.date.accessioned2018-07-20T16:18:34Z
dc.date.available2018-07-20T16:18:34Z
dc.date.created1996
dc.date.issued1996
dc.identifier.isbn0612154092
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/11143/12933
dc.description.abstractLa synthèse des stéroïdes dans le cortex surrénalien est médiée par plusieurs cytochromes P450. Une de ces enzymes, le cytochrome P450cl7, est responsable de deux activités, la 17?-hydroxylation et la 17,20-lyase. Ce cytochrome agit sur deux voies de la stéroïdogénèse surrénalienne, notamment sur la voie ?4, produisant l'androstènedione, et sur la voie ?5, produisant la déshydroépiandrostérone (DHEA). Le cytochrome P450c17 surrénalien est présent chez plusieurs espèces telles que le cobaye, le bœuf, l'humain et le hamster. Le rat et la souris, par contre, n'expriment pas ce cytochrome au niveau surrénalien, mais l'expriment au niveau testiculaire. Les activités du cytochrome P450c17 varient d'une espèce à l'autre, par exemple, chez l'humain et le boeuf, la voie ?5 est plus active, alors que chez le cobaye, le rat et la souris, c'est la voie ?4 qui prévaut. Chez l'humain, le produit majeur résultant des activités du cytochrome P450c17 surrénalien est la DHEA. Cette molécule est sulfatée à l'aide d'une sulfotransférase, formant la déshydroépiandrostérone sulfate (DREAS). Les taux de DREAS plasmatique chez l'humain diminuent lors du vieillissement, et puisque la DREA a été démontrée comme étant impliquée dans la prévention de certains cancers et de l'hypertension, et a aussi été démontrée comme étant un immuno-stimulateur, cette baisse de DREAS peut avoir un effet sur la qualité de vie lors du vieillissement. L'espèce choisie pour effectuer nos études est le hamster puisque le hamster synthétise du cortisol, de l'aldostérone, ainsi que beaucoup de cholestérol surrénalien de novo . L'objet des travaux présentés dans ce mémoire est de caractériser un ADNc complet du cytochrome P450c17 surrénalien de hamster. Pour ce faire, nous avons cloné le P450c17 à partir d'une librairie d'ADNc de surrénales de hamster. La séquence déduite de ce clone comprend 1742 nucléotides (nts), dont 1533 nts encodant une protéine de 511 acides aminés (AA). La séquence déduite en AA a un pourcentage d'identité de 68% avec celle de l'humain. Nous avons ensuite exprimé ce clone dans les cellules COS 1 à l'aide du vecteur pSV*SPORT 1. Les cellules ont été incubées en présence de [14C]pregnénolone, [l14C]progestérone et [3H]17-hydroxyprogestérone. Nos résultats démontrent que le P450c17 de hamster a une activité préférentielle pour les substrats de la voie puisqu'une grande quantité (70%) d'androstènedione est formée après six heures d'incubation avec de la progestérone. L'activité du P450c17 de hamster pour les substrats de la voie ?5 est aussi très bonne puisque 40% de DHEA est formée après six heures d'incubation avec de la pregnénolone. En buvardage du type northern et western, les ARN messagers et les protéines du P450c17 de hamster sont également distribués dans les surrénales et les gonades chez le mâle et la femelle. Par contre, il semble y avoir un dimorphisme sexuel chez le hamster puisque la femelle exprime le P450c17 dans le foie et l'estomac, et non le mâle. Des études in vivo à partir de suspensions de cellules surrénaliennes ou bien de microsomes surrénaliens ont démontré qu'en moyenne, seulement 2.6% de DHEA est formé dans les surrénales de hamster, ce qui démontre qu'il doit y avoir des facteurs dans les surrénales de hamster qui ne sont pas présents dans les cellules COS 1 qui dirigeraient la stéroïdogénèse vers d'autres métabolites. Le cytochrome b5 pourrait grandement affecter l'activité 17,20-lyase du cytochrome P450c17, alors l'ADNc de ce cytochrome a aussi été isolé de la librairie d'ADNc de surrénales de hamster. La séquence déduite de ce cytochrome comprend 770 nts, dont 513 nts encodant la protéine qui est composée de 171 AA.
dc.language.isoeng
dc.publisherUniversité de Sherbrooke
dc.rights© Mario Cloutier
dc.titleÉtudes in vitro et in vivo du cytochrome P450c17 de surrénales de hamster
dc.typeMémoire
tme.degree.disciplineBiochimie
tme.degree.grantorFaculté de médecine et des sciences de la santé
tme.degree.levelMaîtrise
tme.degree.nameM. Sc.


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