Implication des éléments de l'origine de réplication dans l'activité recombinogène de l'antigène grand T du virus du polyome

Abstract

Les papovavirus tels que les virus du polyome ou SV40 représentent des modèles d'étude de la recombinaison dans des cellules de mammifères. Dans des cellules transformées par ces virus, de l'amplification et de l'excision de séquences virales a lieu à grande fréquence. Ces événements impliquent de la recombinaison, qui ne requiert que la protéine grand T (LT) et l'origine de réplication virale. La protéine LT est la protéine de réplication du virus de polyome. On ne connaît pas le mécanisme par lequel cette protéine induit la recombinaison et notre objectif a été de déterminer l'importance de la fonction réplicative de LT et plus précisément de déterminer quelles séquences de l'origine sont impliquées dans la recombinaison. Nous avons utilisé un vecteur rétroviral pour introduire l'origine de réplication de polyome dans des lignées cellulaires de rat. La transfection d'un vecteur d'expression de LT dans des lignées contenant un insert proviral induit de la recombinaison à grande fréquence entre les LTRs avec amplification et excision de séquences d’ADN. Nous avons évalué à un événement par dix générations cellulaires la fréquence de recombinaison; c'est environ 104 fois la fréquence d'amplification dans des cellules somatiques de mammifères. A l'aide de ce système, nous avons testé différents éléments de l'origine de polyome dans leur capacité de permettre la recombinaison dans le locus proviral. Nous avons ainsi montré qu'une mutation dans le core de l'origine qui ne permet plus à l'ADN viral de se répliquer, abolit aussi l'activité recombinogène de LT. Le core de l'origine à lui seul ne permet pas la recombinaison, la présence de l'un des éléments de l'enhancer (? ou ?) est nécessaire. Il est toutefois possible de restaurer l'activité recombinogène du mutant sans enhancer en lui adjoignant une séquence qui lie un facteur de transcription de la famille Rel/KB. Pour l'ensemble des expériences de mutations, il appert que les mêmes séquences en cis sont requises à la fois pour la réplication et pour la recombinaison. Nous avons également montré que la seule séquence exogène requise est celle de l'origine de polyome pour que LT induise la recombinaison dans des cellules. Dans des lignées ne contenant que l'origine virale, l'introduction de LT provoque de la recombinaison entre des séquences cellulaires d'ADN répétitif. Ce résultat pourrait expliquer l'effet toxique observé dans certains types cellulaires lorsque LT est exprimé en présence d'une origine virale fonctionnelle.